Spôsoby izolácie čistej kultúry patogénu. Stanovenie počtu buniek nasadením na tuhé živné médium (metóda Kochova platňa)

Pasteurova metóda Kochova metóda Biologická Fyzikálna

(má historické (lamelové)

význam) vedenie) Chemická metóda Ščukeviča

Moderné

Výsev so slučkou Výsev s lopatkou

(Drigalského metóda)

Metódy izolácie čistých kultúr (schéma 11):

1. Metódy mechanického uvoľňovania sú založené na separácii mikróbov postupným trením testovaného materiálu po povrchu agaru.

A) Pasteurova metóda– má historický význam, umožňuje postupné riedenie testovaného materiálu v tekutom živnom médiu metódou valcovania

b) Kochova metóda– platňová metóda – založená na postupnom riedení testovaného materiálu mäsovo-peptónovým agarom, po ktorom nasleduje nalievanie skúmaviek so zriedeným materiálom do Petriho misiek

V) Drigalského metóda– pri výseve materiálu bohato kontaminovaného mikroflórou použite 2-3 šálky na sekvenčný výsev stierkou.

G) Výsev so slučkou v paralelných ťahoch.

2. Biologické metódy na základe biologických vlastností patogénov.

A) Biologické– infekcia vysoko citlivých zvierat, kde sa mikróby rýchlo množia a hromadia. V niektorých prípadoch je táto metóda jediná, ktorá umožňuje izoláciu kultúry patogénu od chorého človeka (napríklad s tularémiou), v iných prípadoch je citlivejšia (napríklad izolácia pneumokoka u bielych myší alebo pôvodcu ochorenia tuberkulózy u morčiat).

b) Chemický– na základe odolnosti mykobaktérií voči kyselinám. Aby sa materiál oslobodil od sprievodnej flóry, to
ošetrené roztokom kyseliny. Rastú iba bacily tuberkulózy, pretože mikróby odolné voči kyselinám zomreli pod vplyvom kyseliny.

V) Fyzikálna metóda na základe odolnosti spór voči teplu. Na izoláciu kultúry spórotvorných baktérií z
Zmesi sa materiál zahreje na 80 °C a naočkuje sa na živné médium. Rastú iba spórové baktérie, pretože ich spóry zostali nažive a vyvolali rast.

G) Metóda Shchukevich– je založená na vysokej pohyblivosti Proteus vulgaris, ktorá je schopná produkovať plazivý rast.

Spôsob opätovného výsevu z kolónií na šikmé plochy agaru a MPB:

A) Prenos z kolónií na šikmý agar

Mierne otvorte veko misky, vyberte časť oddelenej kolónie kalcinovanou, vychladenou slučkou, otvorte skúmavku so sterilným šikmým agarom, držte ju v ľavej ruke v naklonenej polohe, aby ste mohli pozorovať povrch misky. stredná. Preneste slučku s kultúrou do skúmavky bez toho, aby ste sa dotkli stien, potierajte ju živným médiom, posúvajte sa po povrchu od jedného okraja skúmavky k druhému, zdvihnite ťahy na vrch média - šúľkovanie. Skúmavka sa uzavrie a bez pustenia sa podpíše názov inokulovaného mikróbu a dátum očkovania.

b) Presun z kolónie do mäsovo-peptónového vývaru

Technika dosevu na MPB je v podstate rovnaká ako pri sejbe na pevné médiá. Pri výseve na MPB sa slučka s materiálom ponorí do média. Ak je materiál viskózny a nedá sa odstrániť zo slučky, rozotrie sa na stenu nádoby a potom sa zmyje tekutým médiom. Kvapalný materiál zozbieraný sterilnou Pasteurovou alebo odmernou pipetou sa naleje do živného média.

V dôsledku samostatnej práce by mal študent vedieť:

1. Spôsoby izolácie čistej kultúry mikroorganizmov

2. Spôsoby kultivácie mikroorganizmov

Byť schopný:

1. Zručnosti v dodržiavaní pravidiel protiepidemického režimu a bezpečnostných opatrení

2. Dezinfikujte materiál, dezinfikujte ruky

3. Pripravte prípravky z kolónií baktérií

4. Mikroskopické kolónie

5. Mikroorganizmy podľa Grama

LEKCIA 8

PREDMET. Metódy izolácie čistých kultúr (pokračovanie). Enzymatická aktivita baktérií a metódy jej štúdia.

Ak je na základe určitých príznakov na rastlinách a výsledkov mikroskopického vyšetrenia podozrenie, že pôvodcom ochorenia je baktéria, ďalším krokom by mala byť jej izolácia.

V tomto prípade sa predpokladá, že patogén je kontaminovaný sprievodnými organizmami, t.j. ide o zmiešanú populáciu. Na získanie patogénu vo forme samostatnej rastúcej kolónie by sa mal na médium naniesť tkanivový macerát.

Výsev s nádychom. Pomocou kalcinovanej očkovacej slučky odoberte malé množstvo macerátu rastlinného tkaniva obsahujúceho baktérie a ľahkými pohybmi, bez poškodenia povrchu agaru, naneste 4-6 ťahov na pripravené živné médium. Po opätovnom kalcinovaní slučky sa pohár s médiom otočí o 90° doprava a potom sa od druhého ťahu aplikuje ďalších 4-6 ťahov, ihla sa opäť kalcinuje a vykoná sa tretí výsev. Tým sa dosiahne také zriedenie východiskového materiálu, že baktérie po inkubácii v termostate 48-72 hodín pri 28 °C tvoria jednotlivé kolónie rôznych tvarov a farieb. Kolónie sa potom prenesú do šikmých agarových skúmaviek na ďalšie vyšetrenie. Pomocou kalcinovanej slučky vezmite kolóniu a naneste ju na výživný agar opatrným pohybom vo forme hada alebo cikcaku.

Kochova metóda nalievania. Metóda Kochových platní zabezpečuje, že každá kolónia je vytvorená z jednej bakteriálnej bunky. Najlepšie je pripraviť suspenziu z východiskového materiálu v sterilnej vode a použiť Kochovu metódu len s týmto riedením. Malé množstvo suspenzie sa prenesie do prvej skúmavky so živným médiom ochladeným na 60 °C. Potom sa obsah skúmavky zmieša s inokulom otáčaním medzi dlaňami. Potom vezmite druhú skúmavku, opatrne ju otvorte nad plameňom horáka a pomocou veľkých slučiek do nej preneste tri časti substrátu z prvej skúmavky. Po vystrelení hrdla a zátky sa obsah skúmavky vysype do prvej Petriho misky, pričom sa veko misky otvorí len natoľko, aby sa pod ňu vložilo hrdlo skúmavky. Ihneď po naliatí pohár uzavrite a opatrne rovnomerne rozdeľte živnú pôdu.

Po dôkladnom premiešaní obsahu druhej skúmavky vezmite tretiu skúmavku a preneste do nej pomocou slučky šesť častí substrátu z druhej skúmavky. Obsah skúmavky sa naleje do pohára a obsah skúmavky sa po premiešaní naleje do pohára. Misky s médiom sa inkubujú v termostate pri 28 °C po niekoľkých dňoch, baktérie obsiahnuté vo východiskovom materiáli tvoria kolónie;

Sériový chov. Ak je napríklad potrebné izolovať baktérie z pôdy, potom sa použije sériové riedenie. Sterilné živné médium (15 ml na pohár) sa naleje do pohárov, na stuhnutý agar sa nanesie 0,1 ml posledných troch riedení suspenzie a sklenenou špachtľou sa rozotrie po povrchu.

Na izoláciu baktérií sa 1 g pôdy suspenduje v 9 ml vody, dobre sa pretrepe, nechá sa niekoľko sekúnd usadiť a zo suspenzie sa pripravia sériové riedenia. Pomocou tejto metódy možno určiť počet mikroorganizmov v každej vzorke.

Ak nájdete chybu, zvýraznite časť textu a kliknite Ctrl+Enter.

77288 0

Kultúrne vlastnosti baktérií

Kolónia je izolovaná zbierka buniek rovnakého typu, ktoré vyrástli z jednej bunky (klon buniek). V závislosti od toho, kde mikroorganizmus rastie (na povrchu hustého živného média alebo v jeho hrúbke), sa rozlišujú povrchové, hlboké a spodné kolónie.

Kolónie pestované na povrchu média sú rôznorodé: sú druhovo špecifické a ich štúdium sa používa na určenie druhu skúmanej plodiny.

Pri opise kolónií sa berú do úvahy tieto charakteristiky:
1) tvar kolónie - okrúhly, améboidný, rizoidný, nepravidelný atď.;

2) veľkosť (priemer) kolónie - veľmi malá (špicatá) (0,1-0,5 mm), malá (0,5-3 mm), stredne veľká (3-5 mm) a veľká (viac ako 5 mm v priemere);

3) povrch kolónie je hladký, drsný, zložený, zvrásnený, so sústrednými kruhmi alebo radiálne pruhovaný;

4) profil kolónie - plochý, konvexný, kužeľovitý, kráterovitý atď.;

5) transparentnosť - matná, matná, lesklá, transparentná, prášková;

6) farba kolónie (pigment) - bezfarebná alebo pigmentovaná (biela, žltá, zlatá, červená, čierna), najmä si všimnite uvoľňovanie pigmentu do média s jeho sfarbením;

7) okraj kolónie - hladký, zvlnený, zubatý, strapcovitý atď.;

8) štruktúra kolónie - homogénna, jemnozrnná alebo hrubozrnná, pruhovaná; okraj a štruktúra kolónie sa určí pomocou lupy alebo pri malom zväčšení mikroskopu umiestnením Petriho misky s inokuláciou na stolík mikroskopu s vekom dole;

9) konzistencia kolónie; určuje sa dotykom povrchu slučkou: kolónia môže byť hustá, mäkká, prerastajúca do agaru, hlienovitá (natiahne sa za slučku), krehká (ľahko sa zlomí pri kontakte so slučkou).

Hlboké kolónie najčastejšie vyzerajú ako viac-menej sploštené lentilky (oválneho tvaru so zahrotenými koncami), niekedy hrudky vaty s niťovitými výrastkami do živného média. Tvorba hlbokých kolónií je často sprevádzaná prasknutím hustého média, ak mikroorganizmy uvoľňujú plyn.

Spodné kolónie zvyčajne vyzerajú ako tenké priehľadné filmy šíriace sa pozdĺž dna.

Charakteristiky kolónie sa môžu vekom meniť, závisia od zloženia média a kultivačnej teploty.

Rast mikroorganizmov na tekutých živných pôdach sa berie do úvahy pomocou štvor- až sedemdňových kultúr pestovaných v stacionárnych podmienkach.

V tekutých živných médiách sa s rastom mikroorganizmov pozoruje zakalenie média a tvorba filmu alebo sedimentu.

Pri pestovaní na polotekutých (0,5-0,7 % agar) živných pôdach spôsobujú mobilné mikróby výrazný zákal, imobilné formy rastú len pri výseve injekciou do média.

Rast mikróbov je často sprevádzaný výskytom zápachu, pigmentáciou prostredia a uvoľňovaním plynu. Charakteristický zápach kultúr niektorých druhov baktérií je spojený s tvorbou rôznych esterov (etylacetát, amylacetát a pod.), indolu, merkaptánu, sírovodíka, skatolu, amoniaku, kyseliny maslovej.

Schopnosť tvoriť pigmenty je vlastná mnohým typom mikroorganizmov. Chemická povaha pigmentov je rôznorodá: karotenoidy, antokyány, melaníny. Ak je pigment nerozpustný vo vode, zafarbí sa iba kultúrny plak; ak je rozpustný, sfarbí sa aj živná pôda. Predpokladá sa, že pigmenty chránia baktérie pred škodlivými účinkami slnečného žiarenia, a preto je vo vzduchu toľko pigmentovaných baktérií, navyše sa pigmenty podieľajú na metabolizme týchto mikroorganizmov.

V prírode existujú takzvané fosforeskujúce baktérie, ktorých kultúry v tme žiaria zelenkavo-modravým alebo žltkastým svetlom. Takéto baktérie sa nachádzajú najmä v riečnej alebo morskej vode. Svetelné baktérie – fotobaktérie – zahŕňajú aeróbne baktérie (vibriá, koky, tyčinky).

Izolácia čistých kultúr mikroorganizmov

Skúmaný materiál (voda, pôda, vzduch, potraviny alebo iné predmety) zvyčajne obsahuje asociácie mikróbov.

Izolácia čistej kultúry umožňuje študovať morfologické, kultúrne, biochemické, antigénne a iné charakteristiky, ktorých súhrn určuje druh a typ patogénu, t.j. vykonáva sa jeho identifikácia.

Na izoláciu čistých kultúr mikroorganizmov sa používajú metódy, ktoré možno rozdeliť do niekoľkých skupín:
1. Pasteurova metóda - postupné riedenie testovaného materiálu v tekutom živnom médiu na koncentráciu jednej bunky v objeme (má historický význam).

2. Kochova metóda („platne wire“) - postupné riedenie testovaného materiálu v roztavenom agare (teplota 48-50 C), po ktorom nasleduje naliatie do Petriho misiek, kde agar stuhne. Očkovanie sa robí spravidla z posledných troch alebo štyroch riedení, kde je baktérií málo a neskôr, keď rastú na Petriho miskách, vznikajú izolované kolónie, tvorené z jednej počiatočnej materskej bunky. Z izolovaných kolónií hlboko v agare sa získa čistá kultúra baktérií subkultiváciou na čerstvom médiu.

3. Shukevichova metóda - používa sa na získanie čistej kultúry Proteus a iných mikroorganizmov s „plazivým“ rastom. Testovaný materiál sa naočkuje do kondenzovanej vody na spodku šikmého agaru. Mobilné mikróby (Proteus) sú schopné stúpať po šikmom agare, nehybné formy zostávajú rásť dole, v mieste výsevu. Presadením horných okrajov kultúry môžete získať čistú kultúru.

4. Drigalského metóda - široko používaná v bakteriologickej praxi, pri ktorej sa skúmaný materiál zriedi v skúmavke so sterilným soľným roztokom alebo vývarom. Jedna kvapka materiálu sa pridá do prvej misky a rozotrie sa po povrchu média pomocou sterilnej sklenenej špachtle. Potom tou istou špachtľou (bez toho, aby ste ju spálili v plameni horáka), sa rovnaký výsev vykoná v druhom a treťom pohári.

S každým naočkovaním baktérií zostáva na lopatke stále menej a menej a pri výseve do tretieho pohára sa baktérie rozložia po povrchu živnej pôdy oddelene jedna od druhej. Po 1-7 dňoch udržiavania misiek v termostate (v závislosti od rýchlosti rastu mikroorganizmov) na tretej miske každá baktéria produkuje klon buniek, tvoriacich izolovanú kolóniu, ktorá sa subkultivuje na šikmom agare, aby sa akumulovala čistá kultúra.

5. Weinbergova metóda. Osobitné ťažkosti vznikajú pri izolácii čistých kultúr obligátnych anaeróbov. Ak kontakt s molekulárnym kyslíkom nespôsobí okamžite bunkovú smrť, potom sa očkovanie uskutoční podľa Drigalského metódy, ale potom sa misky okamžite umiestnia do anaerostatu. Častejšie sa však používa spôsob chovu. Jeho podstata spočíva v tom, že riedenie skúmaného materiálu prebieha v roztavenom a ochladenom na 45-50 oC agarovom živnom médiu.

Urobí sa 6-10 postupných riedení, potom sa médium v ​​skúmavkách rýchlo ochladí a povrch sa pokryje vrstvou zmesi parafínu a vazelíny, aby sa zabránilo prenikaniu vzduchu do hrúbky živného média. Niekedy sa živné médium po zasiatí a premiešaní prenesie do sterilných Burri skúmaviek alebo kapilárnych Pasteurových pipiet, ktorých konce sú utesnené. Po úspešnom zriedení rastú izolované kolónie anaeróbov v skúmavkách, skúmavkách Burri a Pasteurových pipetách. Aby boli izolované kolónie jasne viditeľné, používajú sa vyčírené živné pôdy.

Na extrakciu izolovaných kolónií anaeróbov sa skúmavka mierne zahreje otáčaním nad plameňom, pričom sa agar susediaci so stenami roztopí a obsah skúmavky vo forme agarového stĺpca sa vysunie do sterilnej Petriho misky. Agarový stĺpec sa odreže sterilnou pinzetou a kolónie sa odstráni slučkou. Extrahované kolónie sa umiestnia do tekutého média priaznivého pre vývoj izolovaných mikroorganizmov. Agarové médium sa vyfúkne zo skúmavky Burri prechodom plynu cez bavlnenú zátku.

6. Hungate metóda. Keď chcú získať izolované kolónie baktérií s obzvlášť vysokou citlivosťou na kyslík (prísne aeróby), používa sa metóda rotujúcej trubice Hungate. Na tento účel sa roztavené agarové médium naočkuje baktériami konštantným prúdom cez skúmavku s inertným plynom zbaveným kyslíkových nečistôt. Rúrka je potom utesnená gumovou zátkou a umiestnená vodorovne do svorky, ktorá otáča rúrku; médium sa rovnomerne rozloží po stenách skúmavky a stuhne do tenkej vrstvy. Použitie tenkej vrstvy v skúmavke naplnenej zmesou plynov umožňuje získať izolované kolónie, ktoré sú jasne viditeľné voľným okom.

7. Izolácia jednotlivých buniek pomocou mikromanipulátora. Mikromanipulátor je zariadenie, ktoré umožňuje odobrať jednu bunku zo suspenzie pomocou špeciálnej mikropipety alebo mikroslučky. Táto operácia je kontrolovaná pod mikroskopom. Na stolíku mikroskopu je inštalovaná vlhká komora, do ktorej je umiestnený závesný kvapkový prípravok. V držiakoch operačných stojanov sú upevnené mikropipety (micropoops), ktorých pohyb v zornom poli mikroskopu sa vďaka systému skrutiek a pák uskutočňuje s mikrónovou presnosťou. Výskumník pri pohľade cez mikroskop odoberie jednotlivé bunky mikropipetami a prenesie ich do skúmaviek obsahujúcich sterilné tekuté médium, aby získal bunkový klon.

L.V. Timoščenko, M.V. Čubik

Špeciálne prostredia.

V bakteriológii sa široko používajú priemyselne vyrábané suché živné pôdy, čo sú hygroskopické prášky obsahujúce všetky zložky média okrem vody. Na ich prípravu sa používajú tryptické digesty lacných nepotravinových produktov (rybí odpad, mäsokostná múčka, technický kazeín). Sú vhodné na prepravu, dajú sa dlhodobo skladovať, odbremenia laboratóriá od enormného procesu prípravy médií a priblížia ich k riešeniu problematiky štandardizácie médií. Medicínsky priemysel vyrába suché médiá Endo, Levin, Ploskirev, bizmut sulfitový agar, živný agar, uhľohydráty s indikátorom BP a ďalšie.

Termostaty

Termostaty sa používajú na kultiváciu mikroorganizmov.

Termostat je zariadenie, ktoré udržuje konštantnú teplotu. Zariadenie pozostáva z ohrievača, komory, dvojitých stien, medzi ktorými cirkuluje vzduch alebo voda. Teplota je regulovaná termostatom. Optimálna teplota pre rozmnožovanie väčšiny mikroorganizmov je 37°C.

LEKCIA 7

TÉMA: METÓDY IZOLOVANIA ČISTEJ KULTÚRY AERÓBOV. KROKY IZOLOVANIA ČISTEJ KULTÚRY AERÓBNYCH BAKTÉRIÍ METÓDOU MECHANICKEJ DISOCIÁCIE

Plán lekcie

1. Koncept „čistej kultúry“ baktérií

2. Spôsoby izolácie čistých kultúr mechanickou separáciou

3. Biologické metódy izolácie čistých kultúr

4. Metódy identifikácie baktérií

Účel lekcie: Oboznámiť študentov s rôznymi metódami izolácie čistých kultúr, naučiť ich zasievať slučkou, ťahmi a injekciou.

Pokyny pre demonštráciu

V ich prirodzenom prostredí sa baktérie nachádzajú v asociáciách. Aby bolo možné určiť vlastnosti mikróbov a ich úlohu vo vývoji patologického procesu, je potrebné mať baktérie vo forme homogénnych populácií (čistých kultúr). Čistá kultúra je súbor bakteriálnych jedincov rovnakého druhu pestovaných na živnom médiu.

Metódy izolácie čistých kultúr aeróbnych baktérií

Pasteurova metóda Kochova metóda Biologická Fyzikálna

(má historické (doskové vedenie)

význam)

Chemická metóda

Ščukevič

Moderné

Výsev so slučkou Výsev s lopatkou

(Drigalského metóda)

Metódy izolácie čistých kultúr:

1. Mechanické separačné metódy sú založené na separácii mikróbov postupným trením testovaného materiálu po povrchu agaru.

a) Pasteurova metóda – má historický význam, umožňuje postupné riedenie testovaného materiálu v tekutom živnom médiu metódou valcovania

b) Kochova metóda - platňová metóda - je založená na sekvenčnom riedení testovaného materiálu mäsovým peptónovým agarom s následným nalievaním skúmaviek so zriedeným materiálom do Petriho misiek.

c) Drygalského metóda - pri výseve materiálu bohato osiateho mikroflórou použite 2-3 šálky na sekvenčný výsev stierkou.

d) Výsev so slučkou v paralelných ťahoch.

2. Biologické metódy sú založené na biologických vlastnostiach patogénov.

a) Biologická - infekcia vysoko citlivých zvierat, kde sa mikróby rýchlo množia a hromadia. V niektorých prípadoch je táto metóda jediná, ktorá umožňuje izolovať kultúru patogénu od chorého človeka (napríklad s tularémiou), inokedy je citlivejšia (napríklad izolácia pneumokoka u bielych myší alebo tzv. patogén tuberkulózy u morčiat).

b) Chemické – založené na odolnosti mykobaktérií voči kyselinám. Aby sa materiál oslobodil od sprievodnej flóry, to
ošetrené roztokom kyseliny. Rastú len bacily tuberkulózy, pretože mikróby odolné voči kyselinám zomreli pod vplyvom kyseliny.

c) Fyzikálna metóda je založená na odolnosti spór voči teplu. Na izoláciu kultúry spórotvorných baktérií z
Zmesi sa materiál zahreje na 80 °C a naočkuje sa na živné médium. Rastú iba spórové baktérie, pretože ich spóry zostali nažive a vyvolali rast.

d) Shchukevičova metóda - založená na vysokej pohyblivosti Proteus vulgaris, schopného produkovať plazivý rast.

Spôsob prípravy tanierového agaru

MPA sa roztopí vo vodnom kúpeli, potom sa ochladí na 50-55 °C. Hrdlo fľaše sa spáli v plameni liehovej lampy, Petriho misky sa otvoria tak, aby hrdlo fľaše zapadlo bez toho, aby sa dotýkalo okrajov misky, naleje sa 10-15 ml MPA, viečko sa uzavretá, miska sa pretrepe, aby sa médium rovnomerne rozložilo, a nechá sa na vodorovnom povrchu, kým nestuhne. Po vysušení sa platne s agarom uchovávajú v chlade.

Slučkový výsev

Pomocou sterilnej vychladenej slučky odoberte kvapku materiálu, ľavou rukou otvorte jeden okraj pohára, vložte slučku dovnútra a urobte niekoľko ťahov na jednom mieste slučkou na opačnom okraji, potom slučku odtrhnite a naočkujte materiál v paralelných ťahoch od jedného okraja pohára k druhému s intervalom 5-6 mm. Na začiatku výsevu, keď je na slučke veľa mikróbov, budú dávať súvislý rast, ale s každým ťahom je na slučke stále menej a menej mikróbov a zostanú osamelé a vytvárajú izolované kolónie.

Výsev podľa Drigalského metódy

Táto metóda sa používa pri očkovaní materiálu silne kontaminovaného mikroflórou (hnis, výkaly, spútum). Na zasiatie metódou Drigalsky si vezmite lopatku a niekoľko pohárov (3-4). Špachtľa je nástroj vyrobený z kovového drôtu alebo sklenenej šípky, ohnutý do tvaru trojuholníka alebo L. Materiál sa zavedie do prvého pohára pomocou slučky alebo pipety a rovnomerne sa rozloží špachtľou po povrchu média tou istou špachtľou, bez toho, aby sa spálil, materiál sa vtrie do živného média v druhom pohári; v treťom. Pri takomto výseve bude mať prvý pohár súvislý rast a v ďalších pohároch budú rásť izolované kolónie.

Hlavné etapy vývoja mikrobiológie, virológie a imunológie

Patria sem nasledujúce položky:

1.Empirické poznatky(pred vynálezom mikroskopov a ich využitia na štúdium mikrosveta).

J. Fracastoro (1546) navrhol živú povahu pôvodcov infekčných chorôb – contagium vivum.

2.Morfologické obdobie trvalo asi dvesto rokov.

Antonie van Leeuwenhoek v roku 1675 prvýkrát popísané prvoky, v roku 1683 - hlavné formy baktérií. Nedokonalosť prístrojov (maximálne zväčšenie mikroskopov X300) a metód na štúdium mikrosveta neprispeli k rýchlemu hromadeniu vedeckých poznatkov o mikroorganizmoch.

3.Fyziologické obdobie(od roku 1875) - éra L. Pasteura a R. Kocha.

L. Pasteur - štúdium mikrobiologických základov fermentačných a hnilobných procesov, rozvoj priemyselnej mikrobiológie, objasnenie úlohy mikroorganizmov v obehu látok v prírode, objav. anaeróbne mikroorganizmov, vývoj zásad asepsa, metódy sterilizácia, oslabenie ( útlm)virulencia a prijímanie vakcíny (vakcínové kmene).

R. Koch - metóda izolácie čisté kultúry na pevných živných pôdach, metódy farbenia baktérií anilínovými farbivami, objavenie pôvodcov antraxu, cholery ( Kochova čiarka), tuberkulóza (Kochove palice), zlepšenie mikroskopických techník. Experimentálne zdôvodnenie Henleho kritérií, známych ako Henle-Kochove postuláty (triáda).

4.Imunologické obdobie.

I.I. Mechnikov je „básnik mikrobiológie“ podľa obraznej definície Emila Rouxa. Vytvoril novú éru v mikrobiológii - doktrínu imunity (imunitu), rozvinul teóriu fagocytózy a podložil bunkovú teóriu imunity.

Zároveň sa zhromaždili údaje o produkcii v tele protilátky proti baktériám a ich toxíny,čo umožnilo P. Ehrlichovi rozvinúť humorálnu teóriu imunity. V následnej dlhodobej a plodnej diskusii medzi zástancami fagocytárnej a humorálnej teórie sa odhalili mnohé mechanizmy imunity a zrodila sa veda imunológie.

Neskôr sa zistilo, že dedičná a získaná imunita závisí od koordinovanej aktivity piatich hlavných systémov: makrofágov, komplementu, T- a B-lymfocytov, interferónov, hlavného histokompatibilného systému, ktoré poskytujú rôzne formy imunitnej odpovede. I.I. Mečnikov a P. Erlich v roku 1908. bola udelená Nobelova cena.

12. februára 1892 Na stretnutí Ruskej akadémie vied D.I. Ivanovskij oznámil, že pôvodcom choroby tabakovej mozaiky je filtrovateľný vírus. Tento dátum možno považovať za narodeniny virológia, a D.I.Ivanovský je jej zakladateľom. Následne sa ukázalo, že vírusy spôsobujú choroby nielen rastlín, ale aj ľudí, zvierat a dokonca aj baktérií. Avšak až po stanovení podstaty génu a genetického kódu boli vírusy klasifikované ako živá príroda.

5. Ďalšou dôležitou etapou vo vývoji mikrobiológie bola objavenie antibiotík. V roku 1929 A. Fleming objavil penicilín a začala sa éra antibiotickej terapie, ktorá viedla k revolučnému pokroku v medicíne. Neskôr sa ukázalo, že mikróby sa prispôsobujú antibiotikám a štúdium mechanizmov liekovej rezistencie viedlo k objavu druhého extrachromozomálny (plazmidový) genóm baktérie.

Študovať plazmidy ukázali, že sú ešte jednoduchšie štruktúrované organizmy ako vírusy a na rozdiel od nich bakteriofágy nepoškodzujú baktérie, ale poskytujú im ďalšie biologické vlastnosti. Objav plazmidov výrazne rozšíril chápanie foriem existencie života a možných ciest jeho evolúcie.

6. Moderné molekulárne genetické štádium Rozvoj mikrobiológie, virológie a imunológie sa začal v druhej polovici 20. storočia v súvislosti s úspechmi genetiky a molekulárnej biológie a vytvorením elektrónového mikroskopu.

Experimenty na baktériách dokázali úlohu DNA pri prenose dedičných vlastností. Použitie baktérií, vírusov a neskôr plazmidov ako objektov molekulárnej biológie a genetického výskumu viedlo k hlbšiemu pochopeniu základných procesov života. Objasnenie princípov kódovania genetickej informácie v bakteriálnej DNA a stanovenie univerzálnosti genetického kódu umožnilo lepšie pochopiť molekulárne genetické vzorce charakteristické pre viac organizované organizmy.

Dekódovanie genómu Escherichia coli umožnilo navrhnúť a transplantovať gény. Zatiaľ Genetické inžinierstvo vytvorili nové smery biotechnológie.

Bola dešifrovaná molekulovo genetická organizácia mnohých vírusov a mechanizmy ich interakcie s bunkami, bola stanovená schopnosť vírusovej DNA integrovať sa do genómu citlivej bunky a boli stanovené základné mechanizmy vírusovej karcinogenézy.

Imunológia prešla skutočnou revolúciou, ktorá ďaleko presahovala rámec infekčnej imunológie a stala sa jednou z najdôležitejších základných lekárskych a biologických disciplín. K dnešnému dňu je imunológia veda, ktorá študuje nielen ochranu pred infekciami. V modernom zmysle Imunológia je veda, ktorá študuje mechanizmy sebaobrany tela pred všetkým geneticky cudzím, pričom zachováva štrukturálnu a funkčnú integritu tela.

Imunológia v súčasnosti zahŕňa množstvo špecializovaných oblastí, z ktorých medzi najvýznamnejšie popri infekčnej imunológii patrí imunogenetika, imunomorfológia, transplantačná imunológia, imunopatológia, imunohematológia, onkoimunológia, ontogenéza imunológie, vakcinológia a aplikovaná imunodiagnostika.

Mikrobiológia a virológia as základné biologické vedy zahŕňa aj množstvo samostatných vedných disciplín s vlastnými cieľmi a zámermi: všeobecné, technické (priemyselné), poľnohospodárske, veterinárne a tie s najväčším významom pre ľudstvo. lekárska mikrobiológia a virológia.

Lekárska mikrobiológia a virológia študuje pôvodcov infekčných chorôb človeka (ich morfológiu, fyziológiu, ekológiu, biologické a genetické vlastnosti), vyvíja metódy ich kultivácie a identifikácie, špecifické metódy ich diagnostiky, liečby a prevencie.