طرق عزل مزرعة نقية من العامل الممرض. تحديد عدد الخلايا عن طريق البذر على الوسائط المغذية الصلبة (طريقة لوحة كوخ)

طريقة باستور طريقة كوخ الفيزيائية البيولوجية

(له تاريخي (صفائحي)

المعنى) الأسلاك) الطريقة الكيميائية لشتشوكيفيتش

حديث

البذر بالحلقة البذر بالملعقة

(طريقة دريجالسكي)

طرق عزل الثقافات النقية (مخطط 11):

1. طرق الإطلاق الميكانيكيةتعتمد على فصل الميكروبات عن طريق الفرك المتسلسل لمادة الاختبار على سطح الأجار.

أ) طريقة باستور- له أهمية تاريخية، ويوفر التخفيف المتسلسل لمادة الاختبار في وسط مغذي سائل باستخدام طريقة التدحرج

ب) طريقة كوخ- طريقة اللوحة - تعتمد على التخفيف المتسلسل لمادة الاختبار باستخدام أجار ببتون اللحم، يليه صب أنابيب الاختبار التي تحتوي على المادة المخففة في أطباق بتري

الخامس) طريقة دريجالسكي– عند زرع مادة ملوثة بشكل غني بالنباتات الدقيقة، استخدم 2-3 أكواب للبذر المتسلسل باستخدام ملعقة.

ز) البذر بحلقة في ضربات متوازية.

2. الطرق البيولوجيةعلى أساس الخصائص البيولوجية لمسببات الأمراض.

أ) بيولوجي– الإصابة بالحيوانات شديدة الحساسية، حيث تتكاثر الميكروبات وتتراكم بسرعة. في بعض الحالات، تكون هذه الطريقة هي الوحيدة التي تسمح بعزل ثقافة العامل الممرض من شخص مريض (على سبيل المثال، المصاب بمرض التولاريميا)، وفي حالات أخرى تكون أكثر حساسية (على سبيل المثال، عزل المكورات الرئوية في الفئران البيضاء أو العامل المسبب السل في خنازير غينيا).

ب) المواد الكيميائية– على أساس مقاومة حمض المتفطرات. لتحرير المادة من النباتات المصاحبة لها
تعامل مع محلول حمض. فقط عصيات السل هي التي ستنمو، لأن الميكروبات المقاومة للحمض تموت تحت تأثير الحمض.

الخامس) الطريقة الفيزيائيةعلى أساس مقاومة الجراثيم للحرارة. لعزل ثقافة البكتيريا المكونة للبوغ من
المخاليط، يتم تسخين المادة عند 80 درجة مئوية وتلقيحها في وسط غذائي. لن تنمو إلا البكتيريا البوغية، لأن أبواغها ظلت حية وأدت إلى النمو.

ز) طريقة شتشوكيفيتش- يعتمد على الحركة العالية لنبات Proteus vulgaris، القادر على إنتاج نمو زاحف.

طريقة إعادة البذر من المستعمرات على الأجار المائل و MPB:

أ) الانتقال من المستعمرات إلى منحدر الآجار

افتح غطاء الطبق قليلاً، وأزل جزءًا من مستعمرة منفصلة بحلقة مكلسة ومبردة، وافتح أنبوب اختبار به أجار مائل معقم، وأمسكه بيدك اليسرى في وضع مائل، حتى تتمكن من مراقبة سطح الطبق واسطة. انقل الحلقة مع الثقافة إلى أنبوب الاختبار دون لمس الجدران، وافركها فوق الوسط المغذي، وانزلق على طول السطح من إحدى حافة أنبوب الاختبار إلى الأخرى، مع رفع الضربات إلى أعلى الوسط - البذر المتقطع. يتم إغلاق أنبوب الاختبار، ويتم التوقيع دون تركه على اسم الميكروب الملقّح وتاريخ التلقيح.

ب) الانتقال من المستعمرة إلى مرق ببتون اللحم

إن تقنية إعادة البذر على MPB هي في الأساس نفس تقنية البذر على الوسائط الصلبة. عند البذر على MPB، يتم غمر الحلقة التي تحتوي على المادة الموجودة بها في الوسط. إذا كانت المادة لزجة ولا يمكن إزالتها من الحلقة، يتم فركها على جدار الوعاء ثم يتم غسلها بوسيلة سائلة. يتم سكب المادة السائلة، المجمعة باستخدام باستور معقم أو ماصة مدرجة، في الوسط المغذي.

نتيجة للعمل المستقل يجب أن يعرف الطالب:

1. طرق عزل الثقافة النقية للكائنات الحية الدقيقة

2. طرق زراعة الكائنات الحية الدقيقة

يكون قادرا على:

1. مهارات الالتزام بقواعد نظام مكافحة الأوبئة واحتياطات السلامة

2. تطهير المواد وتطهير اليدين

3. تحضير المستحضرات من المستعمرات البكتيرية

4. المستعمرات المجهرية

5. الكائنات الحية الدقيقة وصمة عار الجرام

الدرس 8

موضوع. طرق عزل الزراعات النقية (تابع).النشاط الأنزيمي للبكتيريا وطرق دراستها.

إذا اشتبه، بناءً على أعراض معينة على النباتات ونتائج الفحص المجهري، في أن العامل المسبب للمرض هو بكتيريا، فيجب أن تكون الخطوة التالية هي عزلها.

في هذه الحالة، من المفترض أن العامل الممرض ملوث بالكائنات الحية المصاحبة، أي أن هناك مجموعة سكانية مختلطة. للحصول على العامل الممرض في شكل مستعمرة متنامية منفصلة، ​​يجب أن يتم نقع الأنسجة على الوسط.

البذر بلمسة. باستخدام حلقة التلقيح المكلسة، خذ كمية صغيرة من الأنسجة النباتية التي تحتوي على البكتيريا، وبحركات خفيفة، دون الإضرار بسطح الأجار، قم بتطبيق 4-6 ضربات على الوسط المغذي المُجهز. بعد إعادة تحميص الحلقة، يتم تدوير الكوب بالوسيط بزاوية 90 درجة إلى اليمين ثم يتم تطبيق 4-6 ضربات أخرى من الضربة الثانية، ويتم تحميص الإبرة مرة أخرى ويتم إجراء البذر الثالث. يؤدي هذا إلى تخفيف المادة الأولية بحيث تشكل البكتيريا، بعد الحضانة في منظم الحرارة لمدة 48-72 ساعة عند 28 درجة مئوية، مستعمرات فردية بأشكال وألوان مختلفة. يتم بعد ذلك نقل المستعمرات إلى أنابيب أجار مائلة لمزيد من الفحص. باستخدام حلقة مكلسة، خذ مستعمرة وضعها على أجار المغذيات بحركة دقيقة على شكل ثعبان أو متعرج.

طريقة صب الكوخ. تضمن طريقة لوحة كوخ أن تتكون كل مستعمرة من خلية بكتيرية واحدة. من الأفضل تحضير المعلق من المادة الأولية في ماء معقم واستخدام طريقة كوخ فقط مع هذا التخفيف. يتم نقل كمية صغيرة من المعلق إلى أنبوب الاختبار الأول باستخدام وسط غذائي مبرد إلى 60 درجة مئوية. ثم يتم خلط محتويات الأنبوب مع اللقاح عن طريق تدويره بين راحة اليد. بعد ذلك، خذ أنبوب اختبار ثانيًا، وافتحه بعناية فوق لهب الموقد، واستخدم حلقات كبيرة لنقل ثلاثة أجزاء من الركيزة إليه من أنبوب الاختبار الأول. بعد إطلاق العنق والسدادة، تُسكب محتويات أنبوب الاختبار في طبق بتري الأول، مع فتح غطاء الطبق بما يكفي لإدخال عنق أنبوب الاختبار تحته. مباشرة بعد الصب، أغلق الكوب وقم بتوزيع الوسط المغذي بعناية بالتساوي.

بعد خلط محتويات أنبوب الاختبار الثاني جيدًا، خذ أنبوب اختبار ثالث وانقل ستة أجزاء من الركيزة من الثاني إليه بحلقة. تُسكب محتويات أنبوب الاختبار في كوب، وتُسكب محتويات أنبوب الاختبار بعد الخلط في الكوب. يتم تحضين الأطباق التي تحتوي على الوسط في منظم حرارة عند 28 درجة مئوية، وبعد بضعة أيام، تشكل البكتيريا الموجودة في المادة الأولية مستعمرات.

تربية مسلسلة. على سبيل المثال، إذا كان من الضروري عزل البكتيريا من التربة، فسيتم استخدام التخفيف التسلسلي. يُسكب الوسط المغذي المعقم (15 مل لكل كوب) في أكواب، ويوضع 0.1 مل من التخفيفات الثلاثة الأخيرة للمعلق على الأجار المتصلب وينتشر على السطح باستخدام ملعقة زجاجية.

لعزل البكتيريا، يعلق 1 جرام من التربة في 9 مل من الماء، ويرج جيداً، ويترك ليستقر لبضع ثوان، ويتم تحضير التخفيفات التسلسلية من المعلق. باستخدام هذه الطريقة، يمكن تحديد عدد الكائنات الحية الدقيقة في كل عينة.

إذا وجدت خطأ، يرجى تحديد جزء من النص والنقر عليه السيطرة + أدخل.

77288 0

الخصائص الثقافية للبكتيريا

المستعمرة عبارة عن مجموعة معزولة من الخلايا من نفس النوع والتي نمت من خلية واحدة (استنساخ الخلايا). اعتمادًا على مكان نمو الكائنات الحية الدقيقة (على سطح وسط غذائي كثيف أو سمكه)، يتم التمييز بين المستعمرات السطحية والعميقة والسفلية.

تتنوع المستعمرات المزروعة على سطح الوسط: فهي خاصة بالأنواع وتستخدم دراستها لتحديد أنواع المحصول قيد الدراسة.

عند وصف المستعمرات، يتم أخذ الخصائص التالية بعين الاعتبار:
1) شكل المستعمرة - مستدير، أميبي، جذري، غير منتظم، وما إلى ذلك؛

2) حجم (قطر) المستعمرة - صغير جدًا (مدبب) (0.1-0.5 مم) وصغير (0.5-3 مم) ومتوسط ​​​​الحجم (3-5 مم) وكبير (قطره أكثر من 5 مم) ؛

3) سطح المستعمرة أملس، خشن، مطوي، متجعد، مع دوائر متحدة المركز أو مخطط شعاعيا؛

4) شكل مستعمرة - مسطح، محدب، مخروطي الشكل، على شكل فوهة بركان، وما إلى ذلك؛

5) الشفافية - مملة، غير لامع، لامعة، شفافة، مساحيق؛

6) لون المستعمرة (الصباغ) - عديم اللون أو مصطبغ (أبيض، أصفر، ذهبي، أحمر، أسود)، لاحظ بشكل خاص إطلاق الصباغ في الوسط بتلوينه؛

7) حافة المستعمرة - ناعمة، متموجة، خشنة، مهدب، وما إلى ذلك؛

8) هيكل مستعمرة - متجانس، ناعم أو خشن الحبيبات، معرق؛ يتم تحديد حافة المستعمرة وبنيتها باستخدام عدسة مكبرة أو بتكبير منخفض للمجهر عن طريق وضع طبق بتري مع التلقيح على طاولة المجهر مع وضع الغطاء لأسفل؛

9) اتساق المستعمرة. يتم تحديدها عن طريق ملامسة السطح بحلقة: يمكن أن تكون المستعمرة كثيفة وناعمة وتنمو في أجار ومخاطية (تمتد خلف الحلقة) وهشة (تتكسر بسهولة عند ملامستها للحلقة).

غالبًا ما تبدو المستعمرات العميقة مثل العدس المسطح إلى حد ما (شكل بيضاوي ذو نهايات مدببة)، وأحيانًا كتل من الصوف القطني مع نتوءات تشبه الخيوط في الوسط الغذائي. غالبًا ما يكون تكوين المستعمرات العميقة مصحوبًا بتمزق الوسط الكثيف إذا أطلقت الكائنات الحية الدقيقة الغاز.

تبدو المستعمرات السفلية عادة مثل أفلام رقيقة شفافة منتشرة على طول القاع.

وقد تتغير خصائص المستعمرة مع تقدم العمر؛ فهي تعتمد على تكوين الوسط ودرجة حرارة الزراعة.

يؤخذ نمو الكائنات الحية الدقيقة على الوسائط المغذية السائلة في الاعتبار باستخدام مزارع مدتها أربعة إلى سبعة أيام يتم زراعتها في ظل ظروف ثابتة.

في الوسائط المغذية السائلة، مع نمو الكائنات الحية الدقيقة، يتم ملاحظة تعكر الوسط وتكوين فيلم أو رواسب.

عند النمو على وسائط مغذية شبه سائلة (0.5-0.7٪ أجار)، تسبب الميكروبات المتنقلة تعكرًا واضحًا، وتنمو الأشكال غير المتحركة فقط أثناء البذر عن طريق الحقن في الوسط.

غالبًا ما يكون نمو الميكروبات مصحوبًا بظهور رائحة وتصبغ في البيئة وإطلاق الغازات. ترتبط الرائحة المميزة لثقافات بعض أنواع البكتيريا بتكوين استرات مختلفة (أسيتات الإيثيل، أسيتات الأميل، وما إلى ذلك)، الإندول، المركابتان، كبريتيد الهيدروجين، السكاتول، الأمونيا، حمض الزبدة.

القدرة على تكوين الأصباغ متأصلة في العديد من أنواع الكائنات الحية الدقيقة. الطبيعة الكيميائية للأصباغ متنوعة: الكاروتينات والأنثوسيانين والميلانين. إذا كانت الصبغة غير قابلة للذوبان في الماء، فسيتم تلطيخ اللوحة الثقافية فقط؛ إذا كان قابلاً للذوبان، يصبح الوسط الغذائي ملونًا أيضًا. يُعتقد أن الأصباغ تحمي البكتيريا من التأثيرات الضارة لأشعة الشمس، ولهذا السبب يوجد الكثير من البكتيريا المصطبغة في الهواء، بالإضافة إلى ذلك، تشارك الأصباغ في عملية التمثيل الغذائي لهذه الكائنات الحية الدقيقة.

يوجد في الطبيعة ما يسمى بالبكتيريا الفسفورية، والتي تتوهج ثقافاتها في الظلام بضوء أخضر مزرق أو مصفر. توجد هذه البكتيريا بشكل رئيسي في مياه الأنهار أو مياه البحر. البكتيريا المضيئة - البكتيريا الضوئية - تشمل البكتيريا الهوائية (الضمات، المكورات، العصي).

عزل الثقافات النقية للكائنات الحية الدقيقة

عادة ما تحتوي المادة قيد الدراسة (الماء أو التربة أو الهواء أو الطعام أو أشياء أخرى) على ارتباطات بالميكروبات.

إن عزل الثقافة النقية يجعل من الممكن دراسة الخصائص المورفولوجية والثقافية والكيميائية الحيوية والمستضدية وغيرها من الخصائص، التي يحدد مجملها نوع ونوع العامل الممرض، أي يتم تحديد هويته.

لعزل الثقافات النقية للكائنات الحية الدقيقة، يتم استخدام الطرق التي يمكن تقسيمها إلى عدة مجموعات:
1. طريقة باستور - التخفيف المتسلسل لمادة الاختبار في وسط مغذي سائل إلى تركيز خلية واحدة في الحجم (له أهمية تاريخية).

2. طريقة كوخ ("لوحة الأسلاك") - التخفيف المتسلسل لمادة الاختبار في الأجار المنصهر (درجة الحرارة 48-50 مئوية)، يليها صبها في أطباق بتري، حيث يتصلب الأجار. يتم إجراء التلقيح، كقاعدة عامة، من التخفيفات الثلاثة أو الأربعة الأخيرة، حيث تصبح البكتيريا قليلة وبعد ذلك، عندما تنمو على أطباق بتري، تظهر مستعمرات معزولة، مكونة من خلية أم أولية واحدة. من المستعمرات المعزولة في عمق الآجار، يتم الحصول على مزرعة نقية من البكتيريا عن طريق الزراعة الفرعية على وسط جديد.

3. طريقة شوكيفيتش - تستخدم للحصول على ثقافة نقية من البروتيوس والكائنات الحية الدقيقة الأخرى ذات النمو "الزاحف". يتم تلقيح مادة الاختبار في ماء التكثيف عند قاعدة منحدر الأجار. تستطيع الميكروبات المتحركة (Proteus) أن ترتفع إلى أعلى الأجار المائل، وتبقى الأشكال غير المتحركة لتنمو في الأسفل، في موقع البذر. من خلال إعادة زرع الحواف العلوية للثقافة، يمكنك الحصول على ثقافة نقية.

4. طريقة Drigalsky - تستخدم على نطاق واسع في الممارسة البكتريولوجية، حيث يتم تخفيف المادة قيد الدراسة في أنبوب اختبار بمحلول ملحي معقم أو مرق. تضاف قطرة واحدة من المادة إلى الكوب الأول وتوزع على سطح الوسط باستخدام ملعقة زجاجية معقمة. ثم، بنفس الملعقة (دون حرقها في لهب الموقد)، تتم نفس البذر في الكوب الثاني والثالث.

مع كل تلقيح من البكتيريا، يبقى أقل وأقل على الملعقة، وعند البذر في الكوب الثالث، سيتم توزيع البكتيريا على سطح الوسط المغذي بشكل منفصل عن بعضها البعض. بعد 1-7 أيام من حفظ الأطباق في منظم الحرارة (اعتمادًا على معدل نمو الكائنات الحية الدقيقة)، في الطبق الثالث، تنتج كل بكتيريا نسخة من الخلايا، وتشكل مستعمرة معزولة، والتي يتم زراعتها فرعيًا على أجار مائل من أجل التراكم ثقافة نقية.

5. طريقة واينبرغ. تنشأ صعوبات خاصة عند عزل الثقافات النقية من اللاهوائيات الإجبارية. إذا لم يتسبب التلامس مع الأكسجين الجزيئي في موت الخلايا على الفور، فسيتم إجراء البذر وفقًا لطريقة Drigalsky، ولكن بعد ذلك يتم وضع الأطباق على الفور في أداة التخدير. ومع ذلك، يتم استخدام طريقة التربية في كثير من الأحيان. يكمن جوهرها في حقيقة أن تخفيف المادة قيد الدراسة يتم في وسط منصهر ومبرد إلى وسط مغذي أجار بدرجة حرارة 45-50 درجة مئوية.

يتم إجراء 6-10 تخفيفات متتالية، ثم يتم تبريد الوسط الموجود في أنابيب الاختبار بسرعة ويغطى السطح بطبقة من خليط من البارافين والفازلين لمنع الهواء من اختراق سمك الوسط المغذي. في بعض الأحيان، يتم نقل الوسط المغذي، بعد البذر والخلط، إلى أنابيب بوري معقمة أو ماصات باستور الشعرية، والتي يتم إغلاق أطرافها. مع التخفيف الناجح، تنمو مستعمرات معزولة من اللاهوائيات في أنابيب الاختبار، وأنابيب بوري، وماصات باستور. للتأكد من أن المستعمرات المعزولة مرئية بوضوح، يتم استخدام الوسائط المغذية الموضحة.

لاستخراج مستعمرات معزولة من اللاهوائيات، يتم تسخين الأنبوب قليلاً عن طريق تدويره فوق اللهب، بينما يذوب الأجار المجاور للجدران وتنزلق محتويات الأنبوب على شكل عمود أجار إلى طبق بتري معقم. يتم قطع عمود الأجار بملاقط معقمة ويتم إزالة المستعمرات بحلقة. يتم وضع المستعمرات المستخرجة في وسط سائل مناسب لتطوير الكائنات الحية الدقيقة المعزولة. يتم نفخ وسط الأجار من أنبوب بوري عن طريق تمرير الغاز عبر سدادة قطنية.

6. طريقة هونغات. عندما يريدون الحصول على مستعمرات معزولة من البكتيريا ذات حساسية عالية بشكل خاص للأكسجين (البكتيريا الهوائية الصارمة)، يتم استخدام طريقة الأنبوب الدوار Hungate. وللقيام بذلك، يتم تلقيح وسط الأجار المنصهر بالبكتيريا بتيار ثابت من خلال أنبوب اختبار من الغاز الخامل المتحرر من شوائب الأكسجين. يتم بعد ذلك إغلاق الأنبوب بسدادة مطاطية ووضعه أفقيًا في مشبك يقوم بتدوير الأنبوب؛ يتم توزيع الوسط بالتساوي على جدران أنبوب الاختبار ويتجمد في طبقة رقيقة. إن استخدام طبقة رقيقة في أنبوب اختبار مملوء بخليط الغاز يسمح بالحصول على مستعمرات معزولة يمكن رؤيتها بوضوح بالعين المجردة.

7. عزل الخلايا الفردية باستخدام ميكرومانيبولاتور. المعالج الدقيق هو جهاز يسمح لك بإزالة خلية واحدة من التعليق باستخدام ماصة دقيقة خاصة أو حلقة دقيقة. يتم التحكم في هذه العملية تحت المجهر. يتم تركيب حجرة رطبة على منصة المجهر، حيث يتم وضع مستحضر القطرة المعلقة. يتم تثبيت الماصات الدقيقة (micropoops) في حاملات منصات التشغيل، والتي تتم حركتها في مجال رؤية المجهر بدقة ميكرون بفضل نظام البراغي والرافعات. يقوم الباحث، من خلال المجهر، بإزالة الخلايا الفردية باستخدام الماصات الدقيقة ونقلها إلى أنابيب تحتوي على وسط سائل معقم للحصول على استنساخ الخلية.

إل في. تيموشينكو، م. تشوبيك

بيئات خاصة.

في علم الجراثيم، تُستخدم الوسائط المغذية الجافة المنتجة صناعيًا على نطاق واسع، وهي عبارة عن مساحيق استرطابية تحتوي على جميع مكونات الوسط باستثناء الماء. لإعدادها، يتم استخدام هضم التريبتيك من المنتجات غير الغذائية الرخيصة (نفايات الأسماك واللحوم ووجبة العظام، الكازين التقني). فهي ملائمة للنقل، ويمكن تخزينها لفترة طويلة، وتريح المختبرات من العملية الهائلة لإعداد الوسائط، وتقربها من حل مشكلة توحيد الوسائط. تنتج الصناعة الطبية الوسائط الجافة Endo و Levin و Ploskirev وأجار كبريتيت البزموت وأجار المغذيات والكربوهيدرات مع مؤشر BP وغيرها.

منظمات الحرارة

تستخدم منظمات الحرارة لزراعة الكائنات الحية الدقيقة.

منظم الحرارة هو جهاز يحافظ على درجة حرارة ثابتة. يتكون الجهاز من سخان وغرفة وجدران مزدوجة يدور بينها الهواء أو الماء. يتم تنظيم درجة الحرارة بواسطة منظم الحرارة. درجة الحرارة المثلى لتكاثر معظم الكائنات الحية الدقيقة هي 37 درجة مئوية.

الدرس 7

الموضوع: طرق عزل الثقافة البحتة للهوائيات. خطوات عزل الثقافة النقية للبكتيريا الهوائية بطريقة التفكك الميكانيكي

خطة الدرس

1. مفهوم "الثقافة النقية" للبكتيريا

2. طرق عزل الزراعات النقية بالفصل الميكانيكي

3. الطرق البيولوجية لعزل الزراعات النقية

4. طرق التعرف على البكتيريا

الغرض من الدرس:تعريف الطلاب بطرق مختلفة لعزل الزراعات النقية وتعليم كيفية الزرع بالحلقة والضربات والحقن

المبادئ التوجيهية للمظاهرة

في بيئتها الطبيعية، توجد البكتيريا في الجمعيات. من أجل تحديد خصائص الميكروبات ودورها في تطور العملية المرضية، من الضروري وجود البكتيريا في شكل مجموعات متجانسة (الثقافات النقية). الثقافة النقية عبارة عن مجموعة من الأفراد البكتيرية من نفس النوع المزروعة على وسط غذائي.

طرق عزل المزارع النقية للبكتيريا الهوائية

طريقة باستور طريقة كوخ الفيزيائية البيولوجية

(له تاريخي (لوحة الأسلاك)

معنى)

الطريقة الكيميائية

شتشوكيفيتش

حديث

البذر بالحلقة البذر بالملعقة

(طريقة دريجالسكي)

طرق عزل الثقافات النقية:

1. تعتمد طرق الفصل الميكانيكية على فصل الميكروبات عن طريق الفرك المتسلسل لمادة الاختبار على سطح الأجار.

أ) طريقة باستور - لها أهمية تاريخية، وتنص على التخفيف المتسلسل لمادة الاختبار في وسط مغذي سائل بواسطة طريقة التدحرج

ب) تعتمد طريقة كوخ - طريقة اللوحة - على التخفيف المتسلسل لمادة الاختبار باستخدام أجار ببتون اللحم، يليه صب أنابيب الاختبار التي تحتوي على المادة المخففة في أطباق بتري.

ج) طريقة Drigalsky - عند زرع مادة غنية بالنباتات الدقيقة، استخدم 2-3 أكواب للبذر المتسلسل باستخدام ملعقة.

د) البذر بحلقة في ضربات متوازية.

2. تعتمد الطرق البيولوجية على الخصائص البيولوجية لمسببات الأمراض.

أ) البيولوجية - عدوى الحيوانات شديدة الحساسية، حيث تتكاثر الميكروبات وتتراكم بسرعة. في بعض الحالات، تكون هذه الطريقة هي الوحيدة التي تسمح بعزل ثقافة العامل الممرض من شخص مريض (على سبيل المثال، المصاب بمرض التولاريميا)، وفي حالات أخرى تكون أكثر حساسية (على سبيل المثال، عزل المكورات الرئوية في الفئران البيضاء أو الفئران البيضاء). مسبب مرض السل في خنازير غينيا).

ب) الكيميائية – على أساس مقاومة حمض المتفطرات. لتحرير المادة من النباتات المصاحبة لها
تعامل مع محلول حمض. فقط عصيات السل هي التي ستنمو، لأن الميكروبات المقاومة للحمض تموت تحت تأثير الحمض.

ج) تعتمد الطريقة الفيزيائية على مقاومة الجراثيم للحرارة. لعزل ثقافة البكتيريا المكونة للبوغ من
المخاليط، يتم تسخين المادة عند 80 درجة مئوية وتلقيحها في وسط غذائي. لن تنمو إلا البكتيريا البوغية، لأن أبواغها ظلت حية وأدت إلى النمو.

د) طريقة شتشوكيفيتش - القائمة على الحركة العالية لنبات Proteus vulgaris، القادرة على إنتاج نمو زاحف.

طريقة تحضير طبق الاجار

يتم إذابة MPA في حمام مائي، ثم يتم تبريده إلى 50-55 درجة مئوية. يتم حرق عنق الزجاجة في لهب مصباح الكحول، ويتم فتح أطباق بيتري بحيث تناسب عنق الزجاجة دون لمس حواف الطبق، ويسكب 10-15 مل من MPA، ويوضع الغطاء مغلقا، يتم رج الطبق بحيث يتم توزيع الوسط بالتساوي، ويترك على سطح أفقي حتى يتصلب. بعد التجفيف، يتم تخزين لوحات أجار لوحة في البرد.

حلقة البذر

باستخدام حلقة معقمة مبردة، خذ قطرة من المادة، وافتح إحدى حواف الكوب بيدك اليسرى، وأدخل الحلقة إلى الداخل وقم ببعض الضربات في مكان واحد باستخدام حلقة على الحافة المقابلة، ثم قم بتمزيق الحلقة وقم بالتطعيم يتم رسم المادة بضربات متوازية من حافة الكأس إلى الأخرى بفاصل 5-6 مم. في بداية البذر، عندما يكون هناك الكثير من الميكروبات في الحلقة، فإنها ستعطي نموًا متموجًا، ولكن مع كل ضربة يكون هناك عدد أقل وأقل من الميكروبات في الحلقة، وستظل منفردة وتنتج مستعمرات معزولة.

البذر وفقا لطريقة Drigalsky

تستخدم هذه الطريقة عند تلقيح المواد الملوثة بشدة بالبكتيريا (القيح، البراز، البلغم). للزرع باستخدام طريقة Drigalsky، خذ ملعقة وعدة أكواب (3-4). الملعقة هي أداة مصنوعة من سلك معدني أو سهم زجاجي، مثنية على شكل مثلث أو على شكل حرف L. يتم إدخال المادة في الكوب الأول بحلقة أو ماصة ويتم توزيعها بالتساوي باستخدام ملعقة على سطح الوسط؛ وبنفس الملعقة، دون حرقها، تُفرك المادة في الوسط المغذي في الكوب الثاني، ثم في المجموعة الثالثة. مع مثل هذا البذر، سيكون للكوب الأول نمو متكدس، وسوف تنمو المستعمرات المعزولة في الأكواب اللاحقة.

المراحل الرئيسية في تطور علم الأحياء الدقيقة والفيروسات والمناعة

وتشمل هذه ما يلي:

1.معرفة تجريبية(قبل اختراع المجاهر واستخدامها لدراسة العالم الصغير).

اقترح J. Fracastoro (1546) الطبيعة الحية لعوامل الأمراض المعدية - contagium vivum.

2.الفترة المورفولوجيةاستغرق حوالي مائتي سنة.

أنتوني فان ليفينهوك في عام 1675 تم وصف الأوليات لأول مرة عام 1683 - الأشكال الرئيسية للبكتيريا. لم يساهم النقص في الأدوات (الحد الأقصى للتكبير للمجاهر X300) وطرق دراسة العالم الصغير في التراكم السريع للمعرفة العلمية حول الكائنات الحية الدقيقة.

3.الفترة الفسيولوجية(منذ 1875) - عصر إل. باستور و ر.كوخ.

L. باستور - دراسة الأسس الميكروبيولوجية لعمليات التخمير والتحلل، وتطوير علم الأحياء الدقيقة الصناعي، وتوضيح دور الكائنات الحية الدقيقة في تداول المواد في الطبيعة، والاكتشاف اللاهوائيةالكائنات الحية الدقيقة، وتطوير المبادئ العقيم,طُرق تعقيم،إضعاف ( التوهين)خبثوالاستلام اللقاحات (سلالات اللقاح).

ر. كوخ - طريقة العزل الثقافات النقيةعلى الوسائط المغذية الصلبة، طرق صبغ البكتيريا بأصباغ الأنيلين، اكتشاف العوامل المسببة للجمرة الخبيثة والكوليرا ( فاصلة كوخ)، مرض الدرن (عصي كوخ)،تحسين تكنولوجيا الفحص المجهري. الإثبات التجريبي لمعايير هينلي، المعروفة باسم مسلمات هنلي-كوخ (الثالوث).

4.الفترة المناعية.

I.I Mechnikov هو "شاعر علم الأحياء الدقيقة" وفقًا للتعريف المجازي لإميل رو. لقد أنشأ حقبة جديدة في علم الأحياء الدقيقة - عقيدة المناعة (المناعة)، وتطوير نظرية البلعمة وإثبات النظرية الخلوية للمناعة.

وفي الوقت نفسه، تم تجميع البيانات عن الإنتاج في الجسم الأجسام المضادةضد البكتيريا و منها السموم,مما سمح لـ P. Ehrlich بتطوير النظرية الخلطية للمناعة. وفي المناقشة الطويلة والمثمرة اللاحقة بين مؤيدي نظريتي البلعمة والخلطية، تم الكشف عن العديد من آليات المناعة وولد العلم. علم المناعة.

وقد وجد لاحقًا أن المناعة الوراثية والمكتسبة تعتمد على النشاط المنسق لخمسة أنظمة رئيسية: الخلايا البلعمية، والخلايا المكملة، والخلايا اللمفاوية التائية والبائية، والإنترفيرون، ونظام التوافق النسيجي الرئيسي، الذي يوفر أشكالًا مختلفة من الاستجابة المناعية. I.I Mechnikov و P. Erlich في عام 1908. تم منح جائزة نوبل.

12 فبراير 1892 في اجتماع للأكاديمية الروسية للعلوم، ذكر د.آي إيفانوفسكي أن العامل المسبب لمرض فسيفساء التبغ هو فيروس قابل للتصفية. يمكن اعتبار هذا التاريخ عيد ميلاد علم الفيروسات، ومؤسسها دي.آي.إيفانوفسكي. وتبين بعد ذلك أن الفيروسات تسبب الأمراض ليس فقط في النباتات، ولكن أيضا في البشر والحيوانات وحتى البكتيريا. ومع ذلك، فقط بعد تحديد طبيعة الجين والشفرة الوراثية، تم تصنيف الفيروسات على أنها ذات طبيعة حية.

5. كانت المرحلة المهمة التالية في تطور علم الأحياء الدقيقة اكتشاف المضادات الحيوية. في عام 1929 اكتشف فليمنج البنسلين وبدأ عصر العلاج بالمضادات الحيوية، مما أدى إلى تقدم ثوري في الطب. وتبين لاحقاً أن الميكروبات تتكيف مع المضادات الحيوية، وأدت دراسة آليات مقاومة الأدوية إلى اكتشاف عامل ثانٍ. الجينوم خارج الصبغي (البلازميد).بكتيريا.

دراسة البلازميداتأظهر أنها كائنات أكثر بساطة من الفيروسات، وعلى عكسها العاثياتلا تضر البكتيريا، ولكنها تزودها بخصائص بيولوجية إضافية. لقد أدى اكتشاف البلازميدات إلى توسيع نطاق فهم أشكال وجود الحياة والمسارات المحتملة لتطورها بشكل كبير.

6. حديث المرحلة الوراثية الجزيئيةبدأ تطور علم الأحياء الدقيقة وعلم الفيروسات وعلم المناعة في النصف الثاني من القرن العشرين فيما يتعلق بإنجازات علم الوراثة والبيولوجيا الجزيئية وإنشاء المجهر الإلكتروني.

أثبتت التجارب على البكتيريا دور الحمض النووي في نقل الصفات الوراثية. أدى استخدام البكتيريا والفيروسات والبلازميدات لاحقًا كأشياء للبيولوجيا الجزيئية والبحث الجيني إلى فهم أعمق للعمليات الأساسية الكامنة وراء الحياة. إن توضيح مبادئ تشفير المعلومات الوراثية في الحمض النووي البكتيري وإثبات عالمية الشفرة الوراثية جعل من الممكن فهم الأنماط الجينية الجزيئية المميزة للكائنات الأكثر تنظيماً بشكل أفضل.

لقد أتاح فك تشفير جينوم الإشريكية القولونية إمكانية تصميم الجينات وزرعها. الآن الهندسة الوراثيةخلقت اتجاهات جديدة التكنولوجيا الحيوية.

تم فك رموز التنظيم الوراثي الجزيئي للعديد من الفيروسات وآليات تفاعلها مع الخلايا، وتم تحديد قدرة الحمض النووي الفيروسي على الاندماج في جينوم الخلية الحساسة والآليات الأساسية للتسرطن الفيروسي.

لقد شهد علم المناعة ثورة حقيقية، حيث تجاوز نطاق علم المناعة المعدية وأصبح أحد أهم التخصصات الطبية والبيولوجية الأساسية. حتى الآن، علم المناعة هو العلم الذي يدرس ليس فقط الحماية ضد الالتهابات. بالمعنى الحديث علم المناعة هو العلم الذي يدرس آليات الدفاع عن النفس في الجسم ضد كل ما هو غريب وراثيا، والحفاظ على السلامة الهيكلية والوظيفية للجسم.

يشمل علم المناعة حاليًا عددًا من المجالات المتخصصة، من بينها، إلى جانب علم المناعة المعدية، أهمها علم الوراثة المناعية، وعلم المناعة المناعي، وعلم مناعة زرع الأعضاء، وعلم الأمراض المناعية، وأمراض الدم المناعية، وعلم المناعة الأورام، وعلم المناعة الجيني، وعلم اللقاحات، والتشخيص المناعي التطبيقي.

علم الأحياء الدقيقة وعلم الفيروسات مثل العلوم البيولوجية الأساسيةتشمل أيضًا عددًا من التخصصات العلمية المستقلة التي لها أهدافها وغاياتها الخاصة: العامة والفنية (الصناعية) والزراعية والبيطرية وتلك ذات الأهمية الكبرى للإنسانية علم الأحياء الدقيقة الطبية وعلم الفيروسات.

يدرس علم الأحياء الدقيقة الطبي وعلم الفيروسات العوامل المسببة للأمراض المعدية البشرية (مورفولوجيتها، وعلم وظائف الأعضاء، والبيئة، والخصائص البيولوجية والوراثية)، ويطور طرقًا لزراعتها وتحديدها، وطرقًا محددة لتشخيصها وعلاجها والوقاية منها.