Kaedah untuk mengasingkan budaya tulen patogen. Penentuan bilangan sel dengan menyemai pada media nutrien pepejal (kaedah plat Koch)

Kaedah Pasteur Kaedah Koch Biologi Fizikal

(mempunyai sejarah (lamellar)

maksud) pendawaian) Kaedah Kimia Shchukevich

Moden

Menyemai dengan gelung Menyemai dengan spatula

(Kaedah Drigalski)

Kaedah untuk mengasingkan budaya tulen (Skim 11):

1. Kaedah pelepasan mekanikal adalah berdasarkan pemisahan mikrob dengan menggosok secara berurutan bahan ujian ke atas permukaan agar.

A) Kaedah Pasteur– mempunyai kepentingan sejarah, memperuntukkan pencairan berurutan bahan ujian dalam medium nutrien cecair menggunakan kaedah penggelek

b) Kaedah Koch– kaedah plat – berdasarkan pencairan berurutan bahan ujian dengan agar daging-pepton, diikuti dengan menuang tabung uji dengan bahan yang dicairkan ke dalam piring Petri

V) Kaedah Drigalski– apabila menyemai bahan yang banyak tercemar dengan mikroflora, gunakan 2-3 cawan untuk menyemai berurutan dengan spatula.

G) Menyemai dengan gelung dalam sebatan selari.

2. Kaedah biologi berdasarkan sifat biologi patogen.

A) Biologi– jangkitan haiwan yang sangat sensitif, di mana mikrob cepat membiak dan terkumpul. Dalam sesetengah kes, kaedah ini adalah satu-satunya kaedah yang membolehkan pengasingan budaya patogen daripada orang yang sakit (contohnya, dengan tularemia), dalam kes lain ia lebih sensitif (contohnya, mengasingkan pneumococcus pada tikus putih atau agen penyebabnya. tuberkulosis dalam babi guinea).

b) bahan kimia– berdasarkan rintangan asid mikobakteria. Untuk membebaskan bahan daripada flora yang menyertainya, ia
dirawat dengan larutan asid. Hanya basil tuberkulosis yang akan tumbuh, kerana mikrob tahan asid mati di bawah pengaruh asid.

V) Kaedah fizikal berdasarkan ketahanan spora terhadap haba. Untuk mengasingkan kultur bakteria pembentuk spora daripada
campuran, bahan dipanaskan pada 80°C dan diinokulasi pada medium nutrien. Hanya bakteria spora akan tumbuh, kerana spora mereka kekal hidup dan menimbulkan pertumbuhan.

G) Kaedah Shchukevich– adalah berdasarkan mobiliti tinggi Proteus vulgaris, yang mampu menghasilkan pertumbuhan menjalar.

Kaedah pembenihan semula dari koloni ke agar senget dan MPB:

A) Memindahkan dari koloni ke agar slant

Buka sedikit penutup pinggan mangkuk, keluarkan sebahagian koloni yang berasingan dengan gelung yang dikalsinasi dan sejuk, buka tabung uji dengan agar-agar miring steril, pegang di tangan kiri anda dalam kedudukan condong, supaya anda boleh memerhatikan permukaan sederhana. Pindahkan gelung dengan kultur ke dalam tabung uji tanpa menyentuh dinding, gosokkannya ke atas medium nutrien, gelongsor di sepanjang permukaan dari satu tepi tabung uji ke yang lain, menaikkan pukulan ke bahagian atas pembenihan coretan sederhana. Tabung uji ditutup dan, tanpa dilepaskan, nama mikrob yang diinokulasi dan tarikh inokulasi ditandatangani.

b) Memindahkan dari koloni ke sup daging-pepton

Teknik pembenihan semula pada MPB pada asasnya adalah sama seperti semasa menyemai pada media pepejal. Apabila menyemai pada MPB, gelung dengan bahan di atasnya direndam dalam medium. Jika bahan itu likat dan tidak boleh dikeluarkan dari gelung, ia disapu pada dinding bekas dan kemudian dibasuh dengan medium cecair. Bahan cecair, dikumpulkan dengan Pasteur steril atau pipet bergraduat, dituangkan ke dalam medium nutrien.

Hasil daripada kerja bebas, pelajar harus tahu:

1. Kaedah untuk mengasingkan kultur tulen mikroorganisma

2. Kaedah untuk memupuk mikroorganisma

Mampu untuk:

1. Kemahiran dalam mematuhi peraturan rejim anti-wabak dan langkah keselamatan

2. Nyah kuman bahan, nyah kuman tangan

3. Sediakan persediaan daripada koloni bakteria

4. koloni mikroskopi

5. Mikroorganisma pewarna gram

PELAJARAN 8

SUBJEK. Kaedah untuk mengasingkan budaya tulen (bersambung). Aktiviti enzimatik bakteria dan kaedah untuk mengkajinya.

Jika, berdasarkan gejala tertentu pada tumbuhan dan hasil pemeriksaan mikroskopik, disyaki bahawa agen penyebab penyakit itu adalah bakteria, langkah seterusnya adalah untuk mengasingkannya.

Dalam kes ini, diandaikan bahawa patogen itu tercemar dengan organisma yang mengiringi, iaitu, terdapat populasi bercampur. Untuk mendapatkan patogen dalam bentuk koloni tumbuh yang berasingan, tisu maserat hendaklah dicoretkan ke medium.

Menyemai dengan sentuhan. Menggunakan gelung inokulasi terkalsin, ambil sedikit tisu tumbuhan yang mengandungi bakteria dan, dengan pergerakan ringan, tanpa merosakkan permukaan agar-agar, sapukan 4-6 sapuan pada medium nutrien yang disediakan. Setelah dikalsinkan semula gelung, cawan dengan medium dipusingkan 90° ke kanan dan kemudian 4-6 pukulan lagi digunakan dari pukulan kedua, jarum dikalsinkan semula dan penyemaian ketiga dijalankan. Ini mencapai pencairan bahan permulaan supaya bakteria, selepas pengeraman dalam termostat selama 48-72 jam pada 28 °C, membentuk koloni individu pelbagai bentuk dan warna. Koloni kemudiannya dipindahkan ke tiub agar-agar untuk pemeriksaan lanjut. Menggunakan gelung terkalsin, ambil koloni dan sapukan pada agar-agar nutrien dengan pergerakan berhati-hati dalam bentuk ular atau zigzag.

Kaedah menuang Koch. Kaedah plat Koch memastikan setiap koloni terbentuk daripada sel bakteria tunggal. Adalah lebih baik untuk menyediakan penggantungan dari bahan permulaan dalam air steril dan gunakan kaedah Koch hanya dengan pencairan ini. Sebilangan kecil ampaian dipindahkan ke dalam tabung uji pertama dengan medium nutrien yang disejukkan hingga 60 °C. Kemudian kandungan tiub itu dicampur dengan inokulum dengan memutarkannya di antara tapak tangan. Seterusnya, ambil tabung uji kedua, buka dengan teliti di atas api penunu, dan gunakan gelung besar untuk memindahkan tiga bahagian substrat ke dalamnya dari tabung uji pertama. Selepas menembak leher dan penyumbat, kandungan tabung uji dituangkan ke dalam cawan Petri yang pertama, membuka penutup pinggan itu hanya cukup untuk memasukkan leher tabung uji di bawahnya. Sejurus selepas menuang, tutup cawan dan edarkan medium nutrien secara merata.

Setelah mencampurkan kandungan tabung uji kedua dengan teliti, ambil tabung uji ketiga dan pindahkan enam bahagian substrat dari kedua ke dalamnya dengan gelung. Kandungan tabung uji dituangkan ke dalam cawan, dan kandungan tabung uji, setelah dicampur, dituangkan ke dalam cawan. Hidangan dengan medium diinkubasi dalam termostat pada 28°C; selepas beberapa hari, bakteria yang terkandung dalam bahan permulaan membentuk koloni.

Pembiakan bersiri. Jika, sebagai contoh, adalah perlu untuk mengasingkan bakteria dari tanah, maka pencairan bersiri digunakan. Medium nutrien steril (15 ml setiap cawan) dituangkan ke dalam cawan, 0.1 ml daripada tiga pencairan terakhir penggantungan digunakan pada agar-agar yang mengeras dan disebarkan ke atas permukaan dengan spatula kaca.

Untuk mengasingkan bakteria, 1 g tanah digantung dalam 9 ml air, digoncang dengan baik, dibenarkan untuk mengendap selama beberapa saat, dan pencairan bersiri disediakan dari penggantungan. Dengan menggunakan kaedah ini, bilangan mikroorganisma dalam setiap sampel boleh ditentukan.

Jika anda mendapati ralat, sila serlahkan sekeping teks dan klik Ctrl+Enter.

77288 0

Ciri-ciri budaya bakteria

Koloni ialah koleksi terpencil sel daripada jenis yang sama yang tumbuh daripada satu sel (klon sel). Bergantung pada tempat mikroorganisma tumbuh (di permukaan medium nutrien yang padat atau dalam ketebalannya), koloni permukaan, dalam dan bawah dibezakan.

Koloni yang tumbuh di permukaan medium adalah pelbagai: ia adalah khusus spesies dan kajiannya digunakan untuk menentukan spesies tanaman yang dikaji.

Apabila menerangkan koloni, ciri-ciri berikut diambil kira:
1) bentuk koloni - bulat, amoeboid, rhizoid, tidak teratur, dll.;

2) saiz (diameter) koloni - sangat kecil (runcing) (0.1-0.5 mm), kecil (0.5-3 mm), bersaiz sederhana (3-5 mm) dan besar (lebih daripada 5 mm diameter );

3) permukaan koloni licin, kasar, berlipat, berkedut, dengan bulatan sepusat atau berjejari;

4) profil koloni - rata, cembung, berbentuk kon, berbentuk kawah, dll.;

5) ketelusan - kusam, matte, berkilat, telus, serbuk;

6) warna koloni (pigmen) - tidak berwarna atau berpigmen (putih, kuning, emas, merah, hitam), terutamanya perhatikan pelepasan pigmen ke dalam medium dengan pewarnanya;

7) tepi koloni - licin, bergelombang, bergerigi, berjumbai, dll.;

8) struktur koloni - homogen, berbutir halus atau kasar, berjalur; tepi dan struktur koloni ditentukan menggunakan kaca pembesar atau pada pembesaran rendah mikroskop dengan meletakkan cawan Petri dengan inokulasi di atas meja mikroskop dengan penutup bawah;

9) konsistensi koloni; ditentukan dengan menyentuh permukaan dengan gelung: koloni boleh menjadi padat, lembut, tumbuh menjadi agar-agar, lendir (meregang di belakang gelung), rapuh (mudah pecah apabila bersentuhan dengan gelung).

Koloni dalam paling kerap kelihatan seperti lentil yang lebih kurang leper (bentuk bujur dengan hujung runcing), kadangkala gumpalan bulu kapas dengan tumbuh-tumbuhan seperti benang ke dalam medium nutrien. Pembentukan koloni dalam selalunya disertai dengan pecahnya medium tumpat jika mikroorganisma membebaskan gas.

Koloni bawah biasanya kelihatan seperti filem lutsinar nipis yang merebak di sepanjang bahagian bawah.

Ciri-ciri koloni mungkin berubah mengikut umur, ia bergantung pada komposisi medium dan suhu penanaman.

Pertumbuhan mikroorganisma pada media nutrien cecair diambil kira menggunakan kultur empat hingga tujuh hari yang ditanam dalam keadaan pegun.

Dalam media nutrien cecair, dengan pertumbuhan mikroorganisma, kekeruhan medium dan pembentukan filem atau sedimen diperhatikan.

Apabila tumbuh pada media nutrien separa cecair (0.5-0.7% agar), mikrob mudah alih menyebabkan kekeruhan yang ketara, bentuk tidak bergerak tumbuh hanya semasa menyemai melalui suntikan ke dalam medium.

Selalunya pertumbuhan mikrob disertai dengan penampilan bau, pigmentasi persekitaran, dan pembebasan gas. Bau ciri kultur beberapa jenis bakteria dikaitkan dengan pembentukan pelbagai ester (etil asetat, amil asetat, dll.), indole, mercaptan, hidrogen sulfida, skatole, ammonia, asid butirik.

Keupayaan untuk membentuk pigmen adalah wujud dalam banyak jenis mikroorganisma. Sifat kimia pigmen adalah pelbagai: karotenoid, antosianin, melanin. Jika pigmen tidak larut dalam air, hanya plak budaya yang ternoda; jika ia larut, medium nutrien juga menjadi berwarna. Adalah dipercayai bahawa pigmen melindungi bakteria daripada kesan berbahaya cahaya matahari, itulah sebabnya terdapat banyak bakteria berpigmen di udara; di samping itu, pigmen terlibat dalam metabolisme mikroorganisma ini.

Secara semula jadi, terdapat bakteria pendarfluor yang dipanggil, budaya yang bersinar dalam gelap dengan cahaya kebiruan kehijauan atau kekuningan. Bakteria sebegini ditemui terutamanya dalam air sungai atau laut. Bakteria bercahaya - fotobakteria - termasuk bakteria aerobik (vibrios, cocci, rod).

Pengasingan kultur tulen mikroorganisma

Bahan yang dikaji (air, tanah, udara, makanan atau objek lain) biasanya mengandungi persatuan mikrob.

Pengasingan budaya tulen memungkinkan untuk mengkaji ciri morfologi, budaya, biokimia, antigen dan lain-lain, yang keseluruhannya menentukan spesies dan jenis patogen, iaitu, pengenalannya dibuat.

Untuk mengasingkan kultur tulen mikroorganisma, kaedah digunakan yang boleh dibahagikan kepada beberapa kumpulan:
1. Kaedah Pasteur - pencairan berurutan bahan ujian dalam medium nutrien cecair kepada kepekatan satu sel dalam isipadu (mempunyai kepentingan sejarah).

2. Kaedah Koch ("pendawaian plat") - pencairan berurutan bahan ujian dalam agar-agar lebur (suhu 48-50 C), diikuti dengan menuangkan ke dalam piring Petri, di mana agar-agar menjadi pejal. Inokulasi dibuat, sebagai peraturan, dari tiga atau empat pencairan terakhir, di mana bakteria menjadi sedikit dan kemudian, apabila mereka tumbuh pada hidangan Petri, koloni terpencil muncul, terbentuk daripada satu sel ibu awal. Daripada koloni terpencil jauh di dalam agar, kultur bakteria tulen diperoleh dengan subkultur ke media segar.

3. Kaedah Shukevich - digunakan untuk mendapatkan budaya tulen Proteus dan mikroorganisma lain dengan pertumbuhan "merayap". Bahan ujian disuntik ke dalam air pemeluwapan di dasar condong agar. Mikrob mudah alih (Proteus) dapat menaikkan agar-agar yang condong, bentuk tidak bergerak kekal tumbuh di bawah, di tapak penyemaian. Dengan menyemai semula bahagian atas budaya, anda boleh memperoleh budaya tulen.

4. Kaedah Drigalsky - digunakan secara meluas dalam amalan bakteriologi, di mana bahan yang dikaji dicairkan dalam tabung uji dengan larutan garam steril atau sup. Satu titisan bahan ditambah kepada cawan pertama dan disebarkan ke atas permukaan medium dengan spatula kaca steril. Kemudian, dengan spatula yang sama (tanpa membakarnya dalam api pembakar), penyemaian yang sama dilakukan dalam cawan kedua dan ketiga.

Dengan setiap inokulasi bakteria, semakin kurang kekal pada spatula dan, apabila menyemai pada cawan ketiga, bakteria akan diedarkan di atas permukaan medium nutrien secara berasingan antara satu sama lain. Selepas 1-7 hari menyimpan hidangan dalam termostat (bergantung kepada kadar pertumbuhan mikroorganisma), pada hidangan ketiga, setiap bakteria menghasilkan klon sel, membentuk koloni terpencil, yang disubkultur pada agar-agar yang condong untuk terkumpul. budaya yang murni.

5. Kaedah Weinberg. Kesukaran tertentu timbul apabila mengasingkan budaya tulen anaerob obligat. Jika sentuhan dengan oksigen molekul tidak serta-merta menyebabkan kematian sel, maka pembenihan dijalankan mengikut kaedah Drigalsky, tetapi selepas ini hidangan segera diletakkan dalam anaerostat. Walau bagaimanapun, kaedah pembiakan lebih kerap digunakan. Intipatinya terletak pada fakta bahawa pencairan bahan yang dikaji dijalankan dalam lebur dan disejukkan kepada medium nutrien agar 45-50 oC.

6-10 pencairan berturut-turut dibuat, kemudian medium dalam tabung uji disejukkan dengan cepat dan permukaannya ditutup dengan lapisan campuran parafin dan jeli petroleum untuk mengelakkan udara daripada menembusi ke dalam ketebalan medium nutrien. Kadang-kadang medium nutrien, selepas menyemai dan mencampurkan, dipindahkan ke dalam tiub Burri steril atau pipet Pasteur kapilari, yang hujungnya dimeteraikan. Dengan pencairan yang berjaya, koloni terpencil anaerobes tumbuh dalam tabung uji, tiub Burri, dan pipet Pasteur. Untuk memastikan koloni terpencil kelihatan jelas, media nutrien yang diperjelas digunakan.

Untuk mengekstrak koloni terpencil anaerobes, tiub dipanaskan sedikit dengan memutarkannya di atas api, manakala agar yang bersebelahan dengan dinding cair dan kandungan tiub dalam bentuk tiang agar meluncur keluar ke dalam cawan Petri steril. Lajur agar-agar dipotong dengan pinset steril dan koloni dikeluarkan dengan gelung. Koloni yang diekstrak diletakkan dalam medium cecair yang sesuai untuk pembangunan mikroorganisma terpencil. Medium agar dihembus keluar dari tiub Burri dengan menyalurkan gas melalui palam kapas.

6. Kaedah Hungate. Apabila mereka ingin mendapatkan koloni bakteria terpencil dengan kepekaan yang tinggi terhadap oksigen (aerobes ketat), kaedah tiub berputar Hungate digunakan. Untuk melakukan ini, medium agar lebur diinokulasi dengan bakteria pada arus malar melalui tabung uji gas lengai yang dibebaskan daripada kekotoran oksigen. Tiub kemudiannya dimeterai dengan penyumbat getah dan diletakkan secara mendatar dalam pengapit yang memutarkan tiub; medium diedarkan sama rata ke atas dinding tabung uji dan memejal menjadi lapisan nipis. Penggunaan lapisan nipis dalam tabung uji yang diisi dengan campuran gas membolehkan seseorang memperoleh koloni terpencil yang jelas kelihatan dengan mata kasar.

7. Pengasingan sel individu menggunakan mikromanipulator. Mikromanipulator ialah peranti yang membolehkan anda mengeluarkan satu sel daripada penggantungan menggunakan mikropipet atau gelung mikro khas. Operasi ini dikawal di bawah mikroskop. Ruang lembap dipasang pada pentas mikroskop, di mana penyediaan titisan gantung diletakkan. Mikropipet (mikropoop) dipasang pada pemegang pendirian operasi, pergerakannya dalam bidang pandangan mikroskop dilakukan dengan ketepatan mikron terima kasih kepada sistem skru dan tuas. Penyelidik, melihat melalui mikroskop, mengeluarkan sel individu dengan mikropipet dan memindahkannya ke dalam tiub yang mengandungi medium cecair steril untuk mendapatkan klon sel.

L.V. Timoschenko, M.V. Chubik

Persekitaran khas.

Dalam bakteriologi, media nutrien kering yang dihasilkan secara industri digunakan secara meluas, iaitu serbuk higroskopik yang mengandungi semua komponen medium kecuali air. Untuk penyediaan mereka, pencernaan tryptic produk bukan makanan murah (sisa ikan, daging dan tepung tulang, kasein teknikal) digunakan. Mereka mudah untuk pengangkutan, boleh disimpan untuk masa yang lama, melegakan makmal daripada proses besar penyediaan media, dan membawa mereka lebih dekat untuk menyelesaikan isu penyeragaman media. Industri perubatan menghasilkan media kering Endo, Levin, Ploskirev, agar bismut sulfit, agar nutrien, karbohidrat dengan penunjuk BP dan lain-lain.

Termostat

Termostat digunakan untuk memupuk mikroorganisma.

Termostat ialah peranti yang mengekalkan suhu malar. Peranti ini terdiri daripada pemanas, ruang, dinding berganda, di mana udara atau air beredar. Suhu dikawal oleh termostat. Suhu optimum untuk pembiakan kebanyakan mikroorganisma ialah 37°C.

PELAJARAN 7

TOPIK: KAEDAH UNTUK MENGASINGKAN BUDAYA MURNI AEROB. LANGKAH-LANGKAH PENGASINGAN BUDAYA TUlen BAKTERIA AEROBIK MENGIKUT KAEDAH DISSOSIASI MEKANIKAL

Pelan pembelajaran

1. Konsep "kultur tulen" bakteria

2. Kaedah untuk mengasingkan kultur tulen dengan pengasingan mekanikal

3. Kaedah biologi untuk mengasingkan budaya tulen

4. Kaedah untuk mengenal pasti bakteria

Tujuan pelajaran: Untuk membiasakan pelajar dengan pelbagai kaedah mengasingkan budaya tulen, untuk mengajar cara menyemai dengan gelung, pukulan, dan suntikan

Garis panduan untuk demonstrasi

Dalam habitat semulajadi mereka, bakteria ditemui dalam persatuan. Untuk menentukan sifat mikrob dan peranannya dalam perkembangan proses patologi, adalah perlu untuk mempunyai bakteria dalam bentuk populasi homogen (kultur tulen). Kultur tulen ialah himpunan individu bakteria daripada spesies yang sama yang ditanam pada medium nutrien.

Kaedah untuk mengasingkan kultur tulen bakteria aerobik

Kaedah Pasteur Kaedah Koch Biologi Fizikal

(mempunyai sejarah (pendawaian plat)

Maksud)

Kaedah Kimia

Shchukevich

Moden

Menyemai dengan gelung Menyemai dengan spatula

(Kaedah Drigalski)

Kaedah untuk mengasingkan budaya tulen:

1. Kaedah pengasingan mekanikal adalah berdasarkan pengasingan mikrob dengan menggosok secara berurutan bahan ujian ke atas permukaan agar.

a) Kaedah Pasteur - mempunyai kepentingan sejarah, memperuntukkan pencairan berurutan bahan ujian dalam medium nutrien cecair dengan kaedah penggelek

b) Kaedah Koch - kaedah plat - adalah berdasarkan pencairan berurutan bahan ujian dengan agar-agar pepton daging, diikuti dengan menuang tabung uji dengan bahan yang dicairkan ke dalam piring Petri.

c) Kaedah Drigalsky - apabila menyemai bahan berbiji kaya dengan mikroflora, gunakan 2-3 cawan untuk penyemaian berurutan dengan spatula.

d) Menyemai dengan gelung dalam pukulan selari.

2. Kaedah biologi adalah berdasarkan sifat biologi patogen.

a) Biologi - jangkitan haiwan yang sangat sensitif, di mana mikrob cepat membiak dan terkumpul. Dalam sesetengah kes, kaedah ini adalah satu-satunya kaedah yang membolehkan seseorang mengasingkan budaya patogen daripada orang yang sakit (contohnya, dengan tularemia), dalam kes lain ia lebih sensitif (contohnya, pengasingan pneumococcus pada tikus putih atau patogen tuberkulosis dalam babi guinea).

b) Kimia – berdasarkan rintangan asid mikobakteria. Untuk membebaskan bahan daripada flora yang menyertainya, ia
dirawat dengan larutan asid. Hanya basil tuberkulosis yang akan tumbuh, kerana mikrob tahan asid mati di bawah pengaruh asid.

c) Kaedah fizikal adalah berdasarkan rintangan spora terhadap haba. Untuk mengasingkan kultur bakteria pembentuk spora daripada
campuran, bahan dipanaskan pada 80°C dan diinokulasi pada medium nutrien. Hanya bakteria spora akan tumbuh, kerana spora mereka kekal hidup dan menimbulkan pertumbuhan.

d) Kaedah Shchukevich - berdasarkan mobiliti tinggi Proteus vulgaris, mampu menghasilkan pertumbuhan menjalar.

Kaedah penyediaan agar-agar pinggan

MPA dicairkan dalam tab mandi air, kemudian disejukkan hingga 50-55°C. Leher botol dibakar dalam nyalaan lampu alkohol, cawan Petri dibuka supaya leher botol muat masuk tanpa menyentuh tepi pinggan, 10-15 ml MPA dituangkan ke dalam, penutupnya ditutup, hidangan digoncang supaya medium diedarkan sama rata, dan dibiarkan pada permukaan mendatar sehingga ia mengeras. Selepas kering, plat agar-agar disimpan dalam keadaan sejuk.

Menanam gelung

Menggunakan gelung steril yang disejukkan, ambil setitik bahan, buka satu tepi cawan dengan tangan kiri anda, bawa gelung ke dalam dan buat beberapa pukulan di satu tempat dengan gelung di tepi bertentangan, kemudian koyakkan gelung dan inokulasi bahan dalam pukulan selari dari satu tepi cawan ke yang lain dengan selang 5-6 mm. Pada permulaan penyemaian, apabila terdapat banyak mikrob pada gelung, mereka akan memberikan pertumbuhan konfluen, tetapi dengan setiap strok terdapat semakin sedikit mikrob pada gelung, dan mereka akan kekal bersendirian dan menghasilkan koloni terpencil.

Menyemai mengikut kaedah Drigalsky

Kaedah ini digunakan apabila menyuntik bahan yang sangat tercemar dengan mikroflora (nanah, najis, kahak). Untuk menyemai menggunakan kaedah Drigalsky, ambil spatula dan beberapa cawan (3-4). Spatula ialah alat yang diperbuat daripada dawai logam atau dart kaca, dibengkokkan menjadi segitiga atau bentuk L. Bahan dimasukkan ke dalam cawan pertama dengan gelung atau pipet dan diedarkan sama rata dengan spatula di atas permukaan medium; dengan spatula yang sama, tanpa membakarnya, bahan itu disapu ke dalam medium nutrien dalam cawan kedua, dan kemudian dalam yang ketiga. Dengan penyemaian sedemikian, cawan pertama akan mempunyai pertumbuhan konfluen, dan koloni terpencil akan tumbuh dalam cawan berikutnya.

Peringkat utama dalam pembangunan mikrobiologi, virologi dan imunologi

Ini termasuk yang berikut:

1.Pengetahuan empirikal(sebelum penciptaan mikroskop dan kegunaannya untuk mengkaji dunia mikro).

J. Fracastoro (1546) mencadangkan sifat hidup agen penyakit berjangkit - contagium vivum.

2.Tempoh morfologi mengambil masa kira-kira dua ratus tahun.

Antonie van Leeuwenhoek pada tahun 1675 pertama kali menerangkan protozoa, pada tahun 1683 - bentuk utama bakteria. Ketidaksempurnaan instrumen (pembesaran maksimum mikroskop X300) dan kaedah untuk mengkaji dunia mikro tidak menyumbang kepada pengumpulan pesat pengetahuan saintifik tentang mikroorganisma.

3.Tempoh fisiologi(sejak 1875) - era L. Pasteur dan R. Koch.

L. Pasteur - kajian asas mikrobiologi proses penapaian dan pereputan, perkembangan mikrobiologi industri, penjelasan peranan mikroorganisma dalam peredaran bahan di alam semula jadi, penemuan anaerobik mikroorganisma, pembangunan prinsip asepsis, kaedah pensterilan, melemah ( pengecilan)keganasan dan menerima vaksin (strain vaksin).

R. Koch - kaedah pengasingan budaya murni pada media nutrien pepejal, kaedah pewarnaan bakteria dengan pewarna anilin, penemuan agen penyebab antraks, taun ( Koch koma), batuk kering (Koch melekat), penambahbaikan teknik mikroskopi. Pembuktian eksperimen bagi kriteria Henle, yang dikenali sebagai postulat Henle-Koch (triad).

4.Tempoh imunologi.

I.I. Mechnikov adalah "penyair mikrobiologi" mengikut definisi kiasan Emil Roux. Dia mencipta era baru dalam mikrobiologi - doktrin imuniti (kekebalan), membangunkan teori fagositosis dan menyokong teori imuniti selular.

Pada masa yang sama, data terkumpul mengenai pengeluaran dalam badan antibodi terhadap bakteria dan mereka toksin, yang membenarkan P. Ehrlich mengembangkan teori humoral imuniti. Dalam perbincangan jangka panjang dan membuahkan hasil antara penyokong teori fagosit dan humoral, banyak mekanisme imuniti telah didedahkan dan sains dilahirkan. imunologi.

Ia kemudiannya mendapati bahawa imuniti keturunan dan diperoleh bergantung kepada aktiviti diselaraskan lima sistem utama: makrofaj, pelengkap, T- dan B-limfosit, interferon, sistem histokompatibiliti utama, yang menyediakan pelbagai bentuk tindak balas imun. I.I. Mechnikov dan P. Erlich pada tahun 1908. Hadiah Nobel telah dianugerahkan.

12 Februari 1892 Pada mesyuarat Akademi Sains Rusia, D.I. Ivanovsky melaporkan bahawa agen penyebab penyakit mozek tembakau adalah virus yang boleh ditapis. Tarikh ini boleh dianggap sebagai hari lahir virologi, dan D.I. Ivanovsky ialah pengasasnya. Selepas itu, ternyata virus menyebabkan penyakit bukan sahaja pada tumbuhan, tetapi juga pada manusia, haiwan dan juga bakteria. Walau bagaimanapun, hanya selepas sifat gen dan kod genetik ditubuhkan, virus diklasifikasikan sebagai sifat hidup.

5. Peringkat penting seterusnya dalam pembangunan mikrobiologi ialah penemuan antibiotik. Pada tahun 1929 A. Fleming menemui penisilin dan era terapi antibiotik bermula, membawa kepada kemajuan revolusioner dalam bidang perubatan. Kemudian ternyata mikrob menyesuaikan diri dengan antibiotik, dan kajian tentang mekanisme rintangan dadah membawa kepada penemuan sesaat. genom extrachromosomal (plasmid). bakteria.

belajar plasmid menunjukkan bahawa mereka adalah organisma berstruktur lebih ringkas daripada virus, dan tidak seperti bakteriafaj tidak membahayakan bakteria, tetapi menyediakan mereka dengan sifat biologi tambahan. Penemuan plasmid telah meluaskan pemahaman tentang bentuk kewujudan kehidupan dan kemungkinan laluan evolusinya.

6. Moden peringkat genetik molekul Perkembangan mikrobiologi, virologi dan imunologi bermula pada separuh kedua abad ke-20 berkaitan dengan pencapaian genetik dan biologi molekul, dan penciptaan mikroskop elektron.

Eksperimen ke atas bakteria telah membuktikan peranan DNA dalam penghantaran sifat keturunan. Penggunaan bakteria, virus, dan plasmid kemudiannya sebagai objek biologi molekul dan penyelidikan genetik telah membawa kepada pemahaman yang lebih mendalam tentang proses asas yang mendasari kehidupan. Penjelasan prinsip pengekodan maklumat genetik dalam DNA bakteria dan mewujudkan kesejagatan kod genetik memungkinkan untuk lebih memahami corak genetik molekul ciri organisma yang lebih teratur.

Penyahkodan genom Escherichia coli telah memungkinkan untuk mereka bentuk dan memindahkan gen. Sekarang Kejuruteraan genetik mencipta arah baharu bioteknologi.

Organisasi genetik molekul bagi banyak virus dan mekanisme interaksinya dengan sel telah diuraikan, keupayaan DNA virus untuk berintegrasi ke dalam genom sel sensitif dan mekanisme asas karsinogenesis virus telah ditubuhkan.

Imunologi telah mengalami revolusi tulen, melangkaui skop imunologi berjangkit dan menjadi salah satu disiplin perubatan dan biologi asas yang paling penting. Sehingga kini, imunologi adalah sains yang mengkaji bukan sahaja perlindungan terhadap jangkitan. Dalam pengertian moden Imunologi ialah sains yang mengkaji mekanisme pertahanan diri badan daripada segala sesuatu yang asing secara genetik, mengekalkan integriti struktur dan fungsi badan.

Imunologi pada masa ini merangkumi beberapa bidang khusus, antaranya, bersama dengan imunologi berjangkit, yang paling ketara termasuk imunogenetik, imunomorfologi, imunologi pemindahan, imunopatologi, imunohematologi, onkoimunologi, imunologi ontogenesis, vaksinologi dan imunodiagnostik gunaan.

Mikrobiologi dan virologi sebagai sains biologi asas juga termasuk beberapa disiplin saintifik bebas dengan matlamat dan objektif mereka sendiri: umum, teknikal (perindustrian), pertanian, veterinar dan yang paling penting untuk manusia. mikrobiologi perubatan dan virologi.

Mikrobiologi perubatan dan virologi mengkaji agen penyebab penyakit berjangkit manusia (morfologi, fisiologi, ekologi, ciri biologi dan genetiknya), membangunkan kaedah untuk penanaman dan pengenalannya, kaedah khusus untuk diagnosis, rawatan dan pencegahannya.