Menetelmät patogeenin puhtaan viljelmän eristämiseksi. Solujen lukumäärän määritys kylvämällä kiinteälle ravintoaineelle (Koch-levymenetelmä)

Pasteur-menetelmä Koch-menetelmä Biologinen Fysikaalinen

(on historiallinen (lamelli)

merkitys) johdotus) Shchukevitšin kemiallinen menetelmä

Moderni

Kylvö silmukalla Kylvö lastalla

(Drigalskin menetelmä)

Puhdasviljelmien eristysmenetelmät (kaavio 11):

1. Mekaaniset vapautusmenetelmät Ne perustuvat mikrobien erottamiseen hieromalla testimateriaalia peräkkäin agarin pinnan yli.

A) Pasteurin menetelmä– on historiallisesti merkittävä, mahdollistaa testimateriaalin peräkkäisen laimentamisen nestemäiseen ravintoalustaan ​​valssausmenetelmällä

b) Kochin menetelmä– levymenetelmä – perustuu testimateriaalin peräkkäiseen laimennukseen liha-peptoniagarilla, jonka jälkeen kaadetaan koeputket laimennetulla materiaalilla petrimaljoihin

V) Drigalskin menetelmä– kun kylvetään runsaasti mikroflooraa saastunutta materiaalia, käytä 2-3 kupillista peräkkäiseen kylvämiseen lastalla.

G) Kylvö silmukalla rinnakkain.

2. Biologiset menetelmät perustuu patogeenien biologisiin ominaisuuksiin.

A) Biologinen– erittäin herkkien eläinten infektio, jossa mikrobit lisääntyvät ja kerääntyvät nopeasti. Joissakin tapauksissa tämä menetelmä on ainoa, joka mahdollistaa taudinaiheuttajaviljelmän eristämisen sairaalta henkilöltä (esimerkiksi tularemiasta), toisissa tapauksissa se on herkempi (esimerkiksi pneumokokin eristäminen valkoisissa hiirissä tai taudinaiheuttaja marsujen tuberkuloosista).

b) Kemiallinen– perustuu mykobakteerien happoresistenssiin. Vapauttaaksesi materiaalin mukana tulevasta kasvistosta, se
käsitelty happoliuoksella. Vain tuberkuloosibasillit kasvavat, koska haponkestävät mikrobit kuolivat hapon vaikutuksesta.

V) Fyysinen menetelmä perustuu itiöiden lämmönkestävyyteen. Itiöitä muodostavien bakteerien viljelmän eristämiseksi
Seokset, materiaali kuumennetaan 80 °C:seen ja ympätään ravintoalustaan. Vain itiöbakteerit kasvavat, koska niiden itiöt pysyivät elossa ja aiheuttivat kasvua.

G) Shchukevitšin menetelmä– perustuu Proteus vulgariksen korkeaan liikkuvuuteen, joka pystyy tuottamaan hiipivää kasvua.

Menetelmä pesäkkeiden uudelleenkylvöämiseksi vinoon agariin ja MPB:hen:

A) Siirtyminen pesäkkeistä agar-vinoon

Avaa astian kansi hieman, irrota osa erillisestä pesäkkeestä kalsinoidulla, jäähdytetyllä silmukalla, avaa koeputki steriilillä vinosti agarilla pitäen sitä vasemmassa kädessäsi vinossa asennossa, jotta voit tarkkailla astian pintaa. keskikokoinen. Siirrä silmukka viljelmällä koeputkeen koskettamatta seiniä, hiero sitä ravintoalustan päälle liu'uttamalla pintaa koeputken yhdestä reunasta toiseen nostaen vedot alustan yläosaan - juovan kylvö. Koeputki suljetaan ja inokuloidun mikrobin nimi ja rokotuspäivämäärä allekirjoitetaan irti päästämättä.

b) Siirtyminen pesäkkeestä liha-peptoniliemeen

Uudelleenkylvötekniikka MPB:lle on periaatteessa sama kuin kylvössä kiinteälle alustalle. Kun kylvetään MPB:lle, silmukka ja siinä oleva materiaali upotetaan väliaineeseen. Jos materiaali on viskoosia eikä sitä voida poistaa silmukasta, se hierotaan astian seinämään ja pestään sitten pois nestemäisellä väliaineella. Nestemäinen materiaali, joka on kerätty steriilillä Pasteur- tai mittapipetillä, kaadetaan ravintoalustaan.

Itsenäisen työn tuloksena opiskelijan tulee tietää:

1. Menetelmät mikro-organismien puhtaan viljelmän eristämiseksi

2. Mikro-organismien viljelymenetelmät

Pystyä:

1. Epidemian vastaisen järjestelmän sääntöjen ja turvatoimien noudattamisen taidot

2. Desinfioi materiaali, desinfioi kädet

3. Valmista valmisteet bakteeripesäkkeistä

4. Mikroskooppipesäkkeet

5. Gram-värjäysmikro-organismit

Oppitunti 8

AIHE. Puhdasviljelmien eristysmenetelmät (jatkuu). Bakteerien entsymaattinen aktiivisuus ja menetelmät sen tutkimiseksi.

Jos tiettyjen kasvien oireiden ja mikroskooppisen tutkimuksen tulosten perusteella epäillään, että taudin aiheuttaja on bakteeri, on seuraavaksi eristettävä se.

Tässä tapauksessa oletetaan, että taudinaiheuttaja on kontaminoitunut mukana olevilla organismeilla, eli kyseessä on sekapopulaatio. Jotta taudinaiheuttaja saadaan erillisen kasvavan pesäkkeen muodossa, kudosmaseraatti on levitettävä alustaan.

Kylvö kosketuksella. Otetaan kalsinoidulla inokulaatiosilmukalla pieni määrä bakteereja sisältävää kasvikudosmaseraattia ja levitetään kevyin liikkein agar-pintaa vahingoittamatta 4-6 vetoa valmistettuun ravintoalustaan. Kun silmukka on kalsinoitu uudelleen, kuppi väliaineella käännetään 90° oikealle ja sitten tehdään vielä 4-6 vetoa toisesta vedosta, neula kalsinoidaan uudelleen ja kolmas kylvö suoritetaan. Tällä saadaan aikaan lähtömateriaalin laimennus siten, että bakteerit muodostavat 48-72 tunnin termostaatissa 28 °C:ssa inkuboinnin jälkeen yksittäisiä pesäkkeitä, joilla on eri muotoisia ja värisiä. Pesäkkeet siirretään sitten vino-agar-putkiin lisätutkimuksia varten. Ota pesäke kalsinoidulla silmukalla ja levitä se ravinneagarille varovaisella liikkeellä käärmeen tai siksakin muodossa.

Kochin kaatomenetelmä. Koch-levymenetelmä varmistaa, että jokainen pesäke muodostuu yhdestä bakteerisolusta. On parasta valmistaa suspensio lähtöaineesta steriiliin veteen ja käyttää Koch-menetelmää vain tällä laimennuksella. Pieni määrä suspensiota siirretään ensimmäiseen koeputkeen ravintoalustalla, joka on jäähdytetty 60 °C:seen. Sitten putken sisältö sekoitetaan ymppiin pyörittämällä sitä kämmenten välissä. Ota seuraavaksi toinen koeputki, avaa se varovasti polttimen liekin päällä ja siirrä siihen suuria silmukoita käyttäen kolme osaa substraattia ensimmäisestä koeputkesta. Kaulan ja tulpan polttamisen jälkeen koeputken sisältö kaadetaan ensimmäiseen petrimaljaan avaamalla maljan kansi juuri sen verran, että koeputken kaula työntyy sen alle. Välittömästi kaatamisen jälkeen sulje kuppi ja levitä ravintoaine varovasti tasaisesti.

Kun toisen koeputken sisältö on sekoitettu perusteellisesti, ota kolmas koeputki ja siirrä kuusi osaa substraatista toisesta siihen silmukalla. Koeputken sisältö kaadetaan kuppiin ja koeputken sisältö sekoituksen jälkeen kaadetaan kuppiin. Alustaa sisältäviä maljoja inkuboidaan termostaatissa 28 °C:ssa, muutaman päivän kuluttua lähtöaineen sisältämät bakteerit muodostavat pesäkkeitä.

Sarjakasvatus. Jos esimerkiksi on tarpeen eristää bakteerit maaperästä, käytetään sarjalaimennusta. Steriili ravintoalusta (15 ml kuppia kohden) kaadetaan kuppeihin, 0,1 ml suspension kolmesta viimeisestä laimennoksesta levitetään kovettuneelle agarille ja levitetään pinnalle lasilastalla.

Bakteerien eristämiseksi suspendoidaan 1 g maaperää 9 ml:aan vettä, ravistetaan hyvin, annetaan asettua muutaman sekunnin ajan ja suspensiosta valmistetaan sarjalaimennoksia. Tällä menetelmällä voidaan määrittää mikro-organismien lukumäärä kussakin näytteessä.

Jos löydät virheen, korosta tekstinpätkä ja napsauta Ctrl+Enter.

77288 0

Bakteerien kulttuuriset ominaisuudet

Pesäke on eristetty kokoelma samantyyppisiä soluja, jotka kasvoivat yhdestä solusta (soluklooni). Sen mukaan, missä mikro-organismi kasvaa (tiiviin ravinnealustan pinnalla tai sen paksuudessa), erotetaan pinta-, syvä- ja pohjapesäkkeet.

Alustan pinnalla kasvaneet pesäkkeet ovat monipuolisia: ne ovat lajikohtaisia ​​ja niiden tutkimuksella määritetään tutkittavan viljelykasvin laji.

Pesäkkeitä kuvattaessa seuraavat ominaisuudet otetaan huomioon:
1) pesäkkeen muoto - pyöreä, ameboidi, juurakko, epäsäännöllinen jne.;

2) pesäkkeen koko (halkaisija) - erittäin pieni (terävä) (0,1-0,5 mm), pieni (0,5-3 mm), keskikokoinen (3-5 mm) ja suuri (halkaisijaltaan yli 5 mm);

3) pesäkkeen pinta on sileä, karkea, laskostunut, ryppyinen, samankeskisiä ympyröitä tai säteittäisesti juovainen;

4) pesäkeprofiili - litteä, kupera, kartiomainen, kraatterin muotoinen jne.;

5) läpinäkyvyys - himmeä, matta, kiiltävä, läpinäkyvä, jauhemainen;

6) pesäkkeen väri (pigmentti) - väritön tai pigmentoitu (valkoinen, keltainen, kultainen, punainen, musta), huomioi erityisesti pigmentin vapautuminen väliaineeseen sen värityksen kanssa;

7) pesäkkeen reuna - sileä, aaltoileva, rosoinen, hapsuinen jne.;

8) pesäkerakenne - homogeeninen, hieno- tai karkearakeinen, raidallinen; pesäkkeen reuna ja rakenne määritetään suurennuslasilla tai mikroskoopilla pienellä suurennuksella asettamalla petrimalja siirrosteella mikroskooppipöydälle kansi alaspäin;

9) pesäkkeen yhtenäisyys; määritetään koskettamalla pintaa silmukalla: pesäke voi olla tiheä, pehmeä, kasvaa agariksi, limainen (jousituu silmukan taakse), hauras (katkeutuu helposti koskettaessaan silmukan kanssa).

Syvät pesäkkeet näyttävät useimmiten enemmän tai vähemmän litistyneiltä linsseiltä (soikea muoto, jossa on terävät päät), joskus vanupakkareilta, joissa on lankamaisia ​​kasvaimia ravintoalustaan. Syvien pesäkkeiden muodostumiseen liittyy usein tiheän väliaineen repeämä, jos mikro-organismit vapauttavat kaasua.

Pohjapesäkkeet näyttävät yleensä ohuilta läpinäkyviltä kalvoilta, jotka leviävät pohjaa pitkin.

Pesäkkeen ominaisuudet voivat muuttua iän myötä; ne riippuvat alustan koostumuksesta ja viljelylämpötilasta.

Mikro-organismien kasvu nestemäisellä ravintoalustalla otetaan huomioon käyttämällä 4-7 päivän viljelmiä, jotka on kasvatettu paikallaan olevissa olosuhteissa.

Nestemäisessä ravinneväliaineessa havaitaan mikro-organismien kasvun myötä väliaineen sameutta ja kalvon tai sedimentin muodostumista.

Puolinesteellä (0,5-0,7 % agar) kasvatettaessa liikkuvat mikrobit aiheuttavat voimakasta sameutta, liikkumattomat muodot kasvavat vasta kylvössä ruiskuttamalla alustaan.

Usein mikrobien kasvuun liittyy hajun ilmaantumista, ympäristön pigmentoitumista ja kaasun vapautumista. Joidenkin bakteerityyppien viljelmien ominainen haju liittyy erilaisten esterien (etyyliasetaatti, amyyliasetaatti jne.), indolin, merkaptaanin, rikkivedyn, skatolin, ammoniakin, voihapon muodostumiseen.

Kyky muodostaa pigmenttejä on luontaista monen tyyppisille mikro-organismeille. Pigmenttien kemiallinen luonne on monipuolinen: karotenoidit, antosyaanit, melaniinit. Jos pigmentti on veteen liukenematon, vain viljelmäplakki värjäytyy; jos se on liukoista, myös ravintoaine värjäytyy. Pigmenttien uskotaan suojaavan bakteereja auringonvalon haitallisilta vaikutuksilta, minkä vuoksi ilmassa on niin paljon pigmentoituneita bakteereja, minkä lisäksi pigmentit osallistuvat näiden mikro-organismien aineenvaihduntaan.

Luonnossa on ns. fosforoivia bakteereja, joiden viljelmät hehkuvat pimeässä vihertävän sinertävän tai kellertävän valolla. Tällaisia ​​bakteereja löytyy pääasiassa joki- tai merivedestä. Valobakteerit - valobakteerit - sisältävät aerobisia bakteereja (vibriot, kokit, sauvat).

Mikro-organismien puhtaiden viljelmien eristäminen

Tutkittava materiaali (vesi, maaperä, ilma, ruoka tai muut esineet) sisältää yleensä mikrobiyhdistelmiä.

Puhdasviljelmän eristäminen mahdollistaa morfologisten, kulttuuristen, biokemiallisten, antigeenisten ja muiden ominaisuuksien tutkimisen, joiden kokonaisuus määrää taudinaiheuttajan lajin ja tyypin, eli sen tunnistaminen tehdään.

Mikro-organismien puhtaiden viljelmien eristämiseen käytetään menetelmiä, jotka voidaan jakaa useisiin ryhmiin:
1. Pasteurin menetelmä - testimateriaalin peräkkäinen laimennus nestemäiseen ravintoalustaan ​​yhden solun pitoisuuteen tilavuudessa (on historiallinen merkitys).

2. Koch-menetelmä ("levyjen johdotus") - testimateriaalin peräkkäinen laimentaminen sulaan agariin (lämpötila 48-50 C), jonka jälkeen kaataminen petrimaljoihin, joissa agar jähmettyy. Rokotukset tehdään pääsääntöisesti viimeisestä kolmesta tai neljästä laimennoksesta, jossa bakteereja tulee harvoiksi ja myöhemmin petrimaljoilla kasvaessaan ilmaantuu eristettyjä pesäkkeitä, jotka muodostuvat yhdestä alkuperäisestä emosolusta. Eristetyistä pesäkkeistä syvällä agarissa saadaan puhdas bakteeriviljelmä alaviljelmällä tuoreelle alustalle.

3. Shukevich-menetelmä - käytetään Proteuksen ja muiden mikro-organismien puhdasviljelmän saamiseksi "hiipivällä" kasvulla. Testimateriaali siirrostetaan kondensaatioveteen agar-vinon pohjassa. Liikkuvat mikrobit (Proteus) pystyvät nousemaan vinoagarista ylöspäin, liikkumattomat muodot jäävät kasvamaan alapuolelle, kylvökohdalle. Kylvämällä uudelleen viljelmän yläreunat saat puhtaan viljelmän.

4. Drigalsky-menetelmä - laajalti käytetty bakteriologisessa käytännössä, jossa tutkittava materiaali laimennetaan koeputkessa steriilillä suolaliuoksella tai liemellä. Yksi tippa materiaalia lisätään ensimmäiseen kuppiin ja levitetään alustan pinnalle steriilillä lasilastalla. Sitten samalla lastalla (polttamatta sitä polttimen liekissä) tehdään sama kylvö toiseen ja kolmanteen kuppiin.

Jokaisella bakteerien siirrostuksella lastaan ​​jää yhä vähemmän ja kolmannen kupin päälle kylvettäessä bakteerit jakautuvat ravintoalustan pinnalle erillään toisistaan. Kun maljoja on pidetty 1-7 päivää termostaatissa (riippuen mikro-organismien kasvunopeudesta), kolmannella maljalla kukin bakteeri tuottaa solukloonin, joka muodostaa eristetyn pesäkkeen, joka viljellään kaltevalle agarille kerääntymistä varten. puhdas kulttuuri.

5. Weinbergin menetelmä. Erityisiä vaikeuksia syntyy, kun eristetään obligaattisten anaerobien puhtaita viljelmiä. Jos kosketus molekyylihapen kanssa ei aiheuta välittömästi solukuolemaa, kylvö suoritetaan Drigalsky-menetelmän mukaisesti, mutta tämän jälkeen astiat asetetaan välittömästi anaerostaattiin. Jalostusmenetelmää käytetään kuitenkin useammin. Sen ydin on siinä, että tutkittavan materiaalin laimennus suoritetaan sulassa ja jäähdytetyssä 45-50 oC agar-ravintoalustassa.

Valmistetaan 6-10 peräkkäistä laimennusta, sitten koeputkien väliaine jäähdytetään nopeasti ja pinta peitetään kerroksella parafiinin ja vaseliinin seosta, jotta ilma ei pääse tunkeutumaan ravintoalustan paksuuteen. Joskus ravinneväliaine siirretään kylvön ja sekoittamisen jälkeen steriileihin Burri-putkiin tai kapillaari-Pasteur-pipetteihin, joiden päät suljetaan. Onnistuneella laimennuksella eristettyjä anaerobipesäkkeitä kasvaa koeputkissa, Burri-putkissa ja Pasteur-pipeteissa. Sen varmistamiseksi, että eristetyt pesäkkeet ovat selvästi näkyvissä, käytetään kirkastettuja ravintoalustoja.

Eristettyjen anaerobipesäkkeiden uuttamiseksi putki kuumennetaan hieman pyörittämällä sitä liekin päällä, kun taas seinien vieressä oleva agar sulaa ja putken sisältö agarkolonnin muodossa liukuu ulos steriiliin petrimaljaan. Agarkolonni leikataan steriileillä pinseteillä ja pesäkkeet poistetaan silmukalla. Uutetut pesäkkeet asetetaan nestemäiseen väliaineeseen, joka on suotuisa eristettyjen mikro-organismien kehittymiselle. Agar-elatusaine puhalletaan ulos Burri-putkesta johtamalla kaasu pumpulitulpan läpi.

6. Hungate-menetelmä. Kun halutaan saada eristettyjä bakteeripesäkkeitä, joilla on erityisen korkea happiherkkyys (tiukat aerobit), käytetään Hungate-kiertoputkimenetelmää. Tätä varten sulaan agar-elatusaineeseen siirrostetaan bakteereja vakiovirralla inerttikaasukoeputken läpi, joka on vapautettu happiepäpuhtauksista. Putki suljetaan sitten kumitulpalla ja asetetaan vaakasuoraan puristimeen, joka pyörittää putkea; väliaine jakautuu tasaisesti koeputken seinämille ja jähmettyy ohueksi kerrokseksi. Ohut kerroksen käyttö kaasuseoksella täytetyssä koeputkessa mahdollistaa eristettyjen pesäkkeiden saamisen, jotka näkyvät selvästi paljaalla silmällä.

7. Yksittäisten solujen eristäminen mikromanipulaattorilla. Mikromanipulaattori on laite, jonka avulla voit poistaa yhden solun suspensiosta käyttämällä erityistä mikropipettiä tai mikrosilmukkaa. Tätä toimintaa ohjataan mikroskoopin alla. Mikroskoopin tasolle asennetaan kostea kammio, johon ripustettava pisaravalmiste asetetaan. Leikkaustelineiden pidikkeisiin kiinnitetään mikropipetit (mikropopit), joiden liike mikroskoopin näkökentässä tapahtuu mikronin tarkkuudella ruuvi- ja vipujärjestelmän ansiosta. Mikroskoopin läpi katsova tutkija poistaa yksittäisiä soluja mikropipetteillä ja siirtää ne putkiin, jotka sisältävät steriiliä nestemäistä väliainetta solukloonin saamiseksi.

L.V. Timošenko, M.V. Chubik

Erikoisympäristöt.

Bakteriologiassa käytetään laajasti teollisesti valmistettuja kuivia ravintoalustoja, jotka ovat hygroskooppisia jauheita, jotka sisältävät kaikki alustan komponentit paitsi vettä. Niiden valmistukseen käytetään halpojen ei-elintarvikkeiden (kalajätteet, liha- ja luujauho, tekninen kaseiini) tryptisiä digestioita. Ne ovat käteviä kuljetettavaksi, niitä voidaan säilyttää pitkään, ne vapauttavat laboratoriot valtavasta materiaalinvalmistusprosessista ja tuovat ne lähemmäksi mediastandardointiongelman ratkaisemista. Lääketeollisuus tuottaa kuivaa väliainetta Endo, Levin, Ploskirev, vismuttisulfiittiagaria, ravinneagaria, hiilihydraatteja BP-indikaattorilla ja muita.

Termostaatit

Termostaatteja käytetään mikro-organismien viljelyyn.

Termostaatti on laite, joka ylläpitää tasaista lämpötilaa. Laite koostuu lämmittimestä, kammiosta, kaksoiseinistä, joiden välissä ilma tai vesi kiertää. Lämpötilaa säädetään termostaatilla. Optimaalinen lämpötila useimpien mikro-organismien lisääntymiselle on 37 °C.

Oppitunti 7

AIHE: MENETELMÄT AEROBIEN PUHDASKULTTUURIN ERISTÄMISEKSI. AEROBISTEN BAKTERIOIDEN PUHDASKULTTUURIN ERISTÄMISEN VAIHEET MEKAANISELLA DISSOSIATIOMENETELMÄLLÄ

Tuntisuunnitelma

1. Bakteerien "puhdasviljelmän" käsite

2. Menetelmät puhdasviljelmien eristämiseksi mekaanisella erotuksella

3. Biologiset menetelmät puhdasviljelmien eristämiseksi

4. Menetelmät bakteerien tunnistamiseksi

Oppitunnin tarkoitus: Tutustua erilaisiin puhdasviljelmien eristysmenetelmiin, opettaa kylvöä silmukalla, vedoilla ja ruiskeella

Ohjeet esittelyyn

Luonnollisessa elinympäristössään bakteerit esiintyvät yhdistyksissä. Mikrobien ominaisuuksien ja niiden roolin patologisen prosessin kehittymisessä määrittämiseksi tarvitaan bakteereja homogeenisten populaatioiden (puhdasviljelmien) muodossa. Puhdas viljelmä on kokoelma saman lajin bakteeriyksilöitä, joita on kasvatettu ravintoalustalla.

Menetelmät aerobisten bakteerien puhdasviljelmien eristämiseksi

Pasteur-menetelmä Koch-menetelmä Biologinen Fysikaalinen

(on historiallinen (levyjohdotus)

merkitys)

Kemiallinen menetelmä

Shchukevitš

Moderni

Kylvö silmukalla Kylvö lastalla

(Drigalskin menetelmä)

Puhdasviljelmien eristysmenetelmät:

1. Mekaaniset erotusmenetelmät perustuvat mikrobien erottamiseen hieromalla testimateriaalia peräkkäin agarin pinnan yli.

a) Pasteurin menetelmä - sillä on historiallinen merkitys, se mahdollistaa koemateriaalin peräkkäisen laimentamisen nestemäiseen ravintoalustaan ​​valssausmenetelmällä

b) Kochin menetelmä - levymenetelmä - perustuu koemateriaalin peräkkäiseen laimennukseen lihapeptoniagarilla, jonka jälkeen kaadetaan koeputkia, joissa on laimennettu materiaali petrimaljoihin.

c) Drigalsky-menetelmä - kun kylvetään runsaasti mikroflooraa sisältävää materiaalia, käytä 2-3 kupillista peräkkäiseen kylvämiseen lastalla.

d) Kylvö silmukalla rinnakkain.

2. Biologiset menetelmät perustuvat patogeenien biologisiin ominaisuuksiin.

a) Biologinen - erittäin herkkien eläinten infektio, jossa mikrobit lisääntyvät ja kerääntyvät nopeasti. Joissakin tapauksissa tämä menetelmä on ainoa, jolla patogeeniviljelmä voidaan eristää sairaalta henkilöltä (esimerkiksi tularemiasta), toisissa tapauksissa se on herkempi (esimerkiksi pneumokokkien eristäminen valkoisilla hiirillä tai marsujen tuberkuloosin patogeeni).

b) Kemiallinen – perustuu mykobakteerien happoresistenssiin. Vapauttaaksesi materiaalin mukana tulevasta kasvistosta, se
käsitelty happoliuoksella. Vain tuberkuloosibasillit kasvavat, koska haponkestävät mikrobit kuolivat hapon vaikutuksesta.

c) Fysikaalinen menetelmä perustuu itiöiden lämmönkestävyyteen. Itiöitä muodostavien bakteerien viljelmän eristämiseksi
Seokset, materiaali kuumennetaan 80 °C:seen ja ympätään ravintoalustaan. Vain itiöbakteerit kasvavat, koska niiden itiöt pysyivät elossa ja aiheuttivat kasvua.

d) Shchukevichin menetelmä - perustuu Proteus vulgariksen korkeaan liikkuvuuteen, joka pystyy tuottamaan hiipivää kasvua.

Menetelmä levyagarin valmistamiseksi

MPA sulatetaan vesihauteessa ja jäähdytetään sitten 50-55 °C:seen. Pullon kaula poltetaan alkoholilampun liekissä, petrimaljat avataan niin, että pullon kaula mahtuu koskettamatta astian reunoja, kaadetaan 10-15 ml MPA:ta, kansi suljetaan astiaa ravistellaan niin, että väliaine jakautuu tasaisesti, ja jätetään vaakasuoralle pinnalle, kunnes se kovettuu. Kuivauksen jälkeen levy-agar-levyjä säilytetään kylmässä.

Loop kylvö

Ota steriilillä jäähdytetyllä silmukalla pisara materiaalia, avaa kupin toinen reuna vasemmalla kädelläsi, tuo silmukka sisään ja tee muutama veto yhteen paikkaan silmukan vastakkaisessa reunassa, revi sitten silmukka irti ja rokota. materiaali rinnakkain vedoin kupin reunasta toiseen 5-6 mm välein. Kylvön alussa, kun silmukassa on paljon mikrobeja, ne kasvavat yhteen, mutta jokaisen vedon jälkeen silmukassa on yhä vähemmän mikrobeja ja ne pysyvät yksinäisinä ja tuottavat eristettyjä pesäkkeitä.

Kylvö Drigalsky-menetelmän mukaan

Tätä menetelmää käytetään rokotettaessa materiaalia, joka on voimakkaasti saastunut mikroflooralla (mätä, ulosteet, yskös). Kylvä Drigalsky-menetelmällä ottamalla lasta ja useita kuppeja (3-4). Lasta on työkalu, joka on valmistettu metallilangasta tai lasitikkasta, joka on taivutettu kolmioon tai L-muotoon. Materiaali syötetään ensimmäiseen kuppiin silmukalla tai pipetillä ja jaetaan tasaisesti lastalla väliaineen pinnalle; samalla lastalla, polttamatta sitä, materiaali hierotaan toisen kupin ravintoalustaan ​​ja sitten kolmannessa. Tällaisella kylvöllä ensimmäisellä kupilla on yhtenäinen kasvu ja eristetyt pesäkkeet kasvavat seuraavissa kupeissa.

Mikrobiologian, virologian ja immunologian kehityksen päävaiheet

Näitä ovat seuraavat:

1.Empiirinen tieto(ennen mikroskooppien keksintöä ja niiden käyttöä mikromaailman tutkimiseen).

J. Fracastoro (1546) ehdotti tartuntatautien aiheuttajien elävää luonnetta - contagium vivum.

2.Morfologinen ajanjakso kesti noin kaksisataa vuotta.

Antonie van Leeuwenhoek vuonna 1675 kuvattiin ensimmäisen kerran alkueläimet, vuonna 1683 - bakteerien päämuodot. Instrumenttien (X300-mikroskooppien maksimisuurennus) ja mikromaailman tutkimiseen tarkoitettujen menetelmien epätäydellisyys ei edistänyt mikro-organismeja koskevan tieteellisen tiedon nopeaa kertymistä.

3.Fysiologinen ajanjakso(vuodesta 1875) - L. Pasteurin ja R. Kochin aikakausi.

L. Pasteur - käymis- ja hajoamisprosessien mikrobiologisten perusteiden tutkiminen, teollisen mikrobiologian kehitys, mikro-organismien roolin selvittäminen luonnon aineiden kierrossa, löytö anaerobinen mikro-organismit, periaatteiden kehittäminen aseptinen, menetelmiä sterilointi, heikkeneminen ( vaimennus)virulenssi ja vastaanottaminen rokotteet (rokotekannat).

R. Koch - eristysmenetelmä puhtaat kulttuurit kiinteillä ravintoaineilla, bakteerien värjäysmenetelmät aniliiniväreillä, pernaruton, koleran aiheuttajien löytäminen ( Koch pilkku), tuberkuloosi (Koch tikkuja), mikroskopiatekniikoiden parantaminen. Henlen kriteerien kokeellinen perustelu, joka tunnetaan Henle-Kochin postulaatteina (kolmio).

4.Immunologinen ajanjakso.

I.I. Mechnikov on Emil Roux'n kuvaannollisen määritelmän mukaan "mikrobiologian runoilija". Hän loi uuden aikakauden mikrobiologiaan - immuniteetin (immuniteetin) opin kehittämällä fagosytoositeoriaa ja perustelemalla immuniteetin soluteoriaa.

Samalla kerättiin tietoa kehon tuotannosta vasta-aineita bakteereja ja niitä vastaan toksiinit, joka antoi P. Ehrlichin kehittää humoraalisen immuniteetin teorian. Myöhemmin käydyssä pitkäaikaisessa ja hedelmällisessä keskustelussa fagosyyttisten ja humoraalisten teorioiden kannattajien välillä paljastettiin monia immuniteetin mekanismeja ja tiede syntyi immunologia.

Myöhemmin havaittiin, että perinnöllinen ja hankittu immuniteetti riippuu viiden pääjärjestelmän koordinoidusta toiminnasta: makrofagit, komplementit, T- ja B-lymfosyytit, interferonit, tärkein histoyhteensopivuusjärjestelmä, jotka tarjoavat erilaisia ​​immuunivasteen muotoja. I.I. Mechnikov ja P. Erlich vuonna 1908. Nobel-palkinto myönnettiin.

12. helmikuuta 1892 Venäjän tiedeakatemian kokouksessa D.I. Ivanovsky kertoi, että tupakan mosaiikkitaudin aiheuttaja on suodatettava virus. Tätä päivämäärää voidaan pitää syntymäpäivänä virologia, ja D.I. Ivanovsky on sen perustaja. Myöhemmin kävi ilmi, että virukset aiheuttavat sairauksia paitsi kasveissa, myös ihmisissä, eläimissä ja jopa bakteereissa. Kuitenkin vasta sen jälkeen, kun geenin luonne ja geneettinen koodi oli selvitetty, virukset luokiteltiin eläväksi luonnoksi.

5. Seuraava tärkeä vaihe mikrobiologian kehityksessä oli antibioottien löytäminen. Vuonna 1929 A. Fleming löysi penisilliinin ja antibioottihoidon aikakausi alkoi, mikä johti vallankumoukselliseen edistykseen lääketieteessä. Myöhemmin kävi ilmi, että mikrobit sopeutuvat antibiootteihin, ja lääkeresistenssin mekanismien tutkiminen johti toisen kromosominulkoinen (plasmidi) genomi bakteerit.

Opiskelu plasmidit osoittivat, että ne ovat vieläkin yksinkertaisemmin rakenteellisia organismeja kuin virukset, ja toisin kuin virukset bakteriofagit eivät vahingoita bakteereja, mutta antavat niille lisää biologisia ominaisuuksia. Plasmidien löytäminen on merkittävästi laajentanut ymmärrystä elämän olemassaolon muodoista ja sen mahdollisista evoluution poluista.

6. Moderni molekyyligeneettinen vaihe Mikrobiologian, virologian ja immunologian kehitys alkoi 1900-luvun jälkipuoliskolla genetiikan ja molekyylibiologian saavutusten ja elektronimikroskoopin luomisen yhteydessä.

Bakteereilla tehdyt kokeet ovat osoittaneet DNA:n roolin perinnöllisten ominaisuuksien välittämisessä. Bakteerien, virusten ja myöhemmin plasmidien käyttö molekyylibiologian ja geneettisen tutkimuksen kohteina on johtanut elämän taustalla olevien perusprosessien syvempään ymmärtämiseen. Bakteerien DNA:n geneettisen tiedon koodaamisen periaatteiden selkeyttäminen ja geneettisen koodin universaalisuuden toteaminen mahdollistivat paremmin organisoituneille organismeille ominaisten molekyyligeneettisten mallien ymmärtämisen.

Escherichia colin genomin dekoodaus on mahdollistanut geenien suunnittelun ja siirron. Tähän mennessä Geenitekniikka loi uusia suuntauksia biotekniikka.

Monien virusten molekyyligeneettinen organisaatio ja niiden vuorovaikutuksen mekanismit solujen kanssa on selvitetty, virus-DNA:n kyky integroitua herkän solun genomiin ja viruksen karsinogeneesin perusmekanismit on selvitetty.

Immunologia on käynyt läpi todellisen vallankumouksen, joka on mennyt paljon tarttuvan immunologian ulottumattomiin ja siitä on tullut yksi tärkeimmistä lääketieteen ja biologian perustieteenaloista. Tähän mennessä immunologia on tiedettä, joka ei tutki vain suojaa infektioita vastaan. Nykyisessä mielessä Immunologia on tiede, joka tutkii kehon itsepuolustusmekanismeja kaikelta geneettisesti vieraalta, ylläpitäen kehon rakenteellista ja toiminnallista eheyttä.

Immunologiaan kuuluu tällä hetkellä useita erikoisaloja, joista infektioimmunologian ohella merkittävimpiä ovat immunogenetiikka, immunomorfologia, transplantaatioimmunologia, immunopatologia, immunohematologia, onkoimmunologia, ontogeneesiimmunologia, rokotus ja sovellettu immunodiagnostiikka.

Mikrobiologia ja virologia kuten biologian perustieteet sisältää myös useita itsenäisiä tieteenaloja, joilla on omat päämääränsä: yleiset, tekniset (teolliset), maatalous-, eläinlääketiede ja ihmiskunnan kannalta tärkeimmät lääketieteellinen mikrobiologia ja virologia.

Lääketieteellinen mikrobiologia ja virologia tutkii ihmisen tartuntatautien aiheuttajia (niiden morfologiaa, fysiologiaa, ekologiaa, biologisia ja geneettisiä ominaisuuksia), kehittää menetelmiä niiden viljelyyn ja tunnistamiseen, erityismenetelmiä niiden diagnosointiin, hoitoon ja ehkäisyyn.