සරල වර්ණ ගැන්වීමේ ක්රම උදාහරණ. බැක්ටීරියා සහ ඒවායේ යෙදීම් පැල්ලම් කිරීම සඳහා සංකීර්ණ ක්රම

නිවස / දික්කසාදය

නියැදිය පරීක්ෂා කළ යුතු ද්‍රව්‍ය සහිත පැල්ලම් ස්ථාවරයක් මත තබා ඇත. ඩයි විසඳුමක් පයිප්පයකින් එයට යොදනු ලැබේ. නියමිත වේලාවට පසු, සායම් පරෙස්සමින් වත් කරනු ලැබේ, සකස් කිරීම ජලයෙන් සෝදා පෙරහන් කඩදාසිවලින් වියළනු ලැබේ. සරල ක්රමය එක් සායම් භාවිතා කරයි. සකස් කිරීම මිනිත්තු 3-5 ක් සඳහා මෙතිලීන් නිල් සහ ලෙෆ්ලර්ගේ ක්ෂාරීය නිල් පැහැයෙන් වර්ණාලේප කර ඇති අතර, විනාඩි 1-2 ක් සඳහා Pfeiffer's fuchsin (රූපය 4 බලන්න).

ගිල්වීමේ තෙල් බින්දුවක් වර්ණ ගැන්වූ සහ වියලන ලද සකස් කිරීම සඳහා යොදනු ලැබේ

සංකීර්ණ පින්තාරු කිරීමේ ක්රම

ග්රෑම් පැල්ලම (විශ්වීය ක්රමය). වඩාත්ම පොදු අවකල පැල්ලම් ක්රමය වන්නේ ග්රෑම් පැල්ලමයි.

පැල්ලම් ප්රතිඵල මත පදනම්ව, සියලුම ක්ෂුද්ර ජීවීන් කණ්ඩායම් දෙකකට බෙදා ඇත - ග්රෑම්-ධනාත්මක සහ ග්රෑම්-ඍණ.

ග්රෑම්-ධනාත්මක බැක්ටීරියා ඔවුන්ගේ සෛල බිත්තියේ RNA වල මැග්නීසියම් ලුණු අඩංගු වන අතර, අයඩීන් සහ මූලික සායම් (ජෙන්ටියන්, මෙතිල් හෝ ස්ඵටික වයලට්) සමඟ සංකීර්ණ සංයෝගයක් සාදයි. මෙම සංකීර්ණය ඇල්කොහොල් මගින් විනාශ නොවන අතර බැක්ටීරියා ඔවුන්ගේ දම් පාට රඳවා තබා ගනී.

RNA වල මැග්නීසියම් ලවණ අඩංගු නොවන බැවින් ග්‍රෑම්-ඍණ බැක්ටීරියා වලට ප්‍රධාන සායම් රඳවා ගැනීමට නොහැකි වේ. ඇල්කොහොල් බලපෑම යටතේ, සායම් සෝදා ඇත, සෛල දුර්වර්ණ වී අතිරේක සායම් (muchsin) සමඟ රතු පැහැයක් ගනී.

1. Sinev අනුව සකස් කිරීම මත කඩදාසි කැබැල්ලක් තබා ජල බිංදු කිහිපයක් හෝ ජෙන්ටියන් වයලට් විසඳුමක් යොදන්න. මිනිත්තු 1-2 ක් තීන්ත ආලේප කරන්න. කඩදාසි ඉවත් කරන්න හෝ සායම් ඉවතට ගන්න.
2. ජලය සමග සේදීමකින් තොරව, එය කළු (විනාඩි 1) බවට පත් වන තෙක් ලුගෝල්ගේ විසඳුම යොදන්න, පසුව සායම් ජලය බැස යයි.
3. ජලයෙන් සේදීමකින් තොරව, ඩයි ඉවත් වන තුරු (තත්පර 30-60) 96% ඇල්කොහොල් යොදන්න. ඔබට තත්පර 1-2 ක් සඳහා මත්පැන් වීදුරුවක ඖෂධය ගිල්විය හැකිය.
4. ජලය සමග සූදානම සෝදන්න.
5. මිනිත්තු 3 ක් සඳහා Pfeiffer fuchsin සමඟ අවසන් කරන්න, ජලය සමග සෝදා වියළා ගන්න.

ගිල්වීමේ පද්ධතියක් භාවිතා කරන අන්වීක්ෂය.

Ziehl-Neelsen පැල්ලම (ඇසිඩ්-වේගවත් බැක්ටීරියා සඳහා). සෛල පටලයේ ලිපිඩ, ඉටි සහ හයිඩ්‍රොක්සි අම්ල විශාල ප්‍රමාණයක් ඇති ක්ෂය රෝගය සහ ලාදුරු බැක්ටීරියා හඳුනා ගැනීම සඳහා මෙම ක්‍රමය භාවිතා කරයි. බැක්ටීරියා අම්ල, ක්ෂාර සහ මධ්යසාර-ප්රතිරෝධී වේ. සෛල බිත්තියේ පාරගම්යතාව වැඩි කිරීම සඳහා, පැල්ලම් කිරීමේ පළමු අදියර උණුසුම සමඟ සිදු කෙරේ.

1. ස්ථාවර සූදානම පෙරහන් කඩදාසිවලින් ආවරණය කර ඇති අතර Ziehl fuchsin යොදනු ලැබේ. වීදුරුව කරකැවිල්ලකින් අල්ලාගෙන, වාෂ්ප මුදා හරින තෙක් drug ෂධය දාහක දැල්ල මත රත් කරනු ලැබේ. සායම්වල නව කොටසක් එකතු කර තවත් 2 වතාවක් රත් කරන්න. සිසිලනයෙන් පසු, කඩදාසි ඉවත් කර ජලය සමග සූදානම සෝදා ගන්න.
2. සකස් කිරීම සල්ෆියුරික් අම්ලයේ 5% ක ද්‍රාවණයකින් වර්ණ ගැන්වීම, ද්‍රාවණය තුළ 2-3 වතාවක් ගිල්වීම හෝ වීදුරුව මත අම්ලය වත් කිරීම, පසුව ජලය සමග කිහිප වතාවක් සේදීම.
3. මිනිත්තු 3-5 ක් සඳහා මෙතිලීන් නිල්වල ජලීය-මධ්යසාර ද්රාවණයකින් පැල්ලම් කරන්න, ජලය සමග සෝදා වියළා ගන්න.

ගිල්වීමේ පද්ධතියක් භාවිතා කරන අන්වීක්ෂය.

අම්ල-වේගවත් බැක්ටීරියා රතු පැහැයෙන් වර්ණාලේප කර ඇත, ඉතිරිය නිල් (රූපය 4 බලන්න).

Ozheshko අනුව පැල්ලම් කිරීම (බීජාණු හඳුනා ගැනීම). 1. 0.5% හයිඩ්‍රොක්ලෝරික් අම්ල ද්‍රාවණයක බින්දු කිහිපයක් වාතයේ වියළන ලද ස්මියර් එකකට වත් කර වාෂ්ප සාදනු ලබන තෙක් රත් කරන්න. ඖෂධය වියලන ලද අතර ගින්නක් මත සවි කර ඇත.

2. Ziehl-Neelsen ක්රමයට අනුව පැල්ලම්. අම්ල-වේගවත් බීජාණු රෝස-රතු පැහැයෙන් වර්ණාලේප කර ඇති අතර බැක්ටීරියා සෛලය නිල් (රූපය 4 බලන්න).

Burri-Hins පැල්ලම් කිරීම (කැප්සියුල හඳුනා ගැනීම). මෙම ක්රමය ඍණ ලෙස හැඳින්වේ, සූදානම් වීමේ පසුබිම සහ බැක්ටීරියා සෛලය පැල්ලම් වී ඇති නමුත්, කැප්සියුලය නොකැළැල්ව පවතී.

1. කළු තීන්ත බින්දුවක්, 10 වතාවක් තනුක කර, වීදුරු ස්ලයිඩයකට යොදනු ලැබේ. ඒකට සංස්කෘතිය බිංදුවක් එකතු වෙනවා. ඇඹරුම් වීදුරුවක දාරය භාවිතා කරමින්, ලේ තැවරීමක් මෙන් මදයක් සාදා වියළා ගනී.
2. මධ්යසාර හෝ sublimate සමග රසායනිකව ස්ථාවර. ජලය සමග ප්රවේශමෙන් සේදීම.
3. 3-5 විනාඩි සඳහා Pfeiffer fuchsin සමග පැල්ලම්. ප්රවේශමෙන් සෝදා වාතය වියළා ගන්න.

අවධානය! සකස් කිරීම හානි නොකිරීමට පෙරහන කඩදාසි භාවිතා නොකරන්න.

ගිල්වීමේ පද්ධතියක් භාවිතා කරන අන්වීක්ෂය. සූදානමේ පසුබිම කළු පාටයි, සෛල රතු පාටයි, කැප්සියුල නොකැඩූ (රූපය 4 බලන්න).

වර්ණ ගැන්වීමේ ක්රම. සරල හෝ සංකීර්ණ ක්රම භාවිතයෙන් ස්මෑම් පැල්ලම් කර ඇත. සරල ඒවාට එක් සායම් සමඟ සූදානම වර්ණ ගැන්වීම ඇතුළත් වේ; සංකීර්ණ ක්රම (Gram, Ziehl-Nielsen, ආදිය අනුව) ඩයි වර්ග කිහිපයක අනුක්රමික භාවිතය ඇතුළත් වන අතර අවකල රෝග විනිශ්චය අගයක් ඇත. ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ගේ ඩයි වර්ග සම්බන්ධය ටින්ක්ටෝරියල් ගුණ ලෙස සැලකේ. ධජය, සෛල බිත්ති, නියුක්ලියෝයිඩ් සහ විවිධ සයිටොප්ලාස්මික් ඇතුළත් කිරීම් හඳුනා ගැනීම සඳහා භාවිතා කරන විශේෂ පැල්ලම් කිරීමේ ක්‍රම තිබේ.

සරල ක්රම වලදී, ඇනිලීන් ඩයි වර්ග (මූලික හෝ ආම්ලික) භාවිතා කරමින්, ඕනෑම එක් සායම් වර්ගයක් සමග ස්මෑර් පැල්ලම් කර ඇත. වර්ණක අයනය (ක්‍රෝමෝෆෝර්) කැටායනයක් නම්, සායම්වල මූලික ගුණ ඇත, වර්ණදේහය ඇනායනයක් නම්, සායම්වල ආම්ලික ගුණ ඇත. අම්ල ඩයි වර්ග - erythrosine, අම්ල fuchsin, eosin. ප්රධාන සායම් වන්නේ ජෙන්ටියන් වයලට්, ස්ඵටික වයලට්, මෙතිලීන් නිල්, මූලික ෆුචින්. ප්රධාන වශයෙන් ක්ෂුද්ර ජීවීන් පැල්ලම් කිරීම සඳහා, මූලික ඩයි වර්ග භාවිතා කරනු ලැබේ, සෛලයේ ආම්ලික සංරචක වලට වඩාත් තීව්ර ලෙස බැඳී ඇත. සංතෘප්ත ඇල්කොහොල් ද්‍රාවණ වියළි සායම් වලින් සකස් කර කුඩු ආකාරයෙන් විකුණනු ලබන අතර ක්ෂුද්‍රජීවී සෛල පැල්ලම් කිරීමට භාවිතා කරන ජලීය මධ්‍යසාර ද්‍රාවණ ඒවායින් පිළියෙළ කරනු ලැබේ. ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් පැල්ලම් කරනු ලබන්නේ නිශ්චිත කාලයක් සඳහා තීන්ත මතුපිටට ඩයි වත් කිරීමෙනි. මූලික fuchsin සමග පැල්ලම් කිරීම විනාඩි 2 ක්, මෙතිලීන් නිල් සමග 5-7 විනාඩි සිදු කරනු ලැබේ. ගලා යන ජල ධාරාවන් අවර්ණ වන තෙක් ස්මියර් වතුරෙන් සෝදා, පෙරහන් කඩදාසිවලින් ප්‍රවේශමෙන් මකා දැමීමෙන් සහ ගිල්වීමේ පද්ධතියක අන්වීක්ෂයකින් වියළනු ලැබේ. ආලේපනය නිවැරදිව පැල්ලම් කර සෝදා ඇත්නම්, දර්ශන ක්ෂේත්රය සම්පූර්ණයෙන්ම විනිවිද පෙනෙන අතර සෛල දැඩි ලෙස වර්ණවත් වේ.

සෛල ව්‍යුහය අධ්‍යයනය කිරීමට සහ ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් වෙන්කර හඳුනා ගැනීමට සංකීර්ණ පැල්ලම් ක්‍රම භාවිතා කරයි. ගිල්වීමේ පද්ධතියක් තුළ පැල්ලම් සහිත ස්මියර් අන්වීක්ෂීයව පරීක්ෂා කරනු ලැබේ. සකස් කිරීම සඳහා රසායනික සංයුතිය සහ වර්ණය, මෝර්ඩන්ට්, ඇල්කොහොල්, අම්ල ආදියෙහි වෙනස් වන ඇතැම් ඩයි වර්ග අඛණ්ඩව යොදන්න.

මූලික පැල්ලම් කිහිපයක් තිබේ: Gram, Ziehl-Nelson, Aujeszky, Neisser, Buri-Hins.

ග්රෑම් පැල්ලම් කිරීමේ යාන්ත්රණය සහ පියවර

1. ජෙන්ටියන් වයලට් වල කාබෝලික් ඇල්කොහොල් ද්‍රාවණයක් පෙරහන් කඩදාසි තීරුවක් හරහා ස්ථාවර ස්මියර් එකකට යොදන්න. මිනිත්තු 1-2 කට පසු, එය ඉවත් කර සායම් ඉවතට ගන්න.

2. විනාඩි 1-2 (අයඩින්) සඳහා Lugol's විසඳුම යොදන්න

3. සායම්වල වයලට් ධාරා පිටවීම නතර වන තෙක් තත්පර 30-60 අතර කාලයක් එතිල් මධ්‍යසාරයෙන් වර්ණ ගන්වන්න.

4. ජලය සමග සේදීම

5. විනාඩි 1-2 ක් සඳහා ජලීය fuchsin ද්රාවණයකින් අවසන් කරන්න, ජලය, වියළි සහ අන්වීක්ෂය සමග මෙයට පිළියමක්.

* ග්රෑම්-ධනාත්මක බැක්ටීරියා තද දම් පාට, ග්රෑම්-ඍණ බැක්ටීරියා රතු පැහැය.

Ziehl-Nelson පැල්ලම් කිරීමේ යාන්ත්‍රණය සහ අදියර

1. ෆිල්ටර් කඩදාසි තීරුවක් හරහා ස්ථාවර ස්මියර් එකකට කාබන් ෆුචින් ද්‍රාවණය යොදන්න සහ විනාඩි 3-5ක් වාෂ්ප දිස්වන තුරු රත් කරන්න.

2. කඩදාසි ඉවත් කරන්න, ජලය සමග smear මෙයට පිළියමක්

3. 5% සල්ෆියුරික් අම්ල ද්‍රාවණයක් හෝ ඇල්කොහොල් සහ හයිඩ්‍රොක්ලෝරික් අම්ල මිශ්‍රණයක 3% ද්‍රාවණයක් විනාඩි 1-2ක් අවර්ණ කිරීමට යොදන්න.

4. ජලය සමග සේදීම

5. මිනිත්තු 3-5 ක් සඳහා මෙතිලීන් නිල් ජලීය ද්රාවණයකින් ස්මෑම් අවසන් කරන්න.

6. ජලය, වියළි සහ අන්වීක්ෂය සමග සේදීම

* අම්ල-ප්‍රතිරෝධී - දුර්වර්ණ සහ okr. මෙතිලීන් නිල් නිල් පැහැයට හැරෙන අතර අම්ල-ප්‍රතිරෝධී ඒවා මැජෙන්ටා රතු පැහැයෙන් පවතී.

වසංගත කාරකය

රෝග කාරකය වන්නේ යර්සීනියා පෙස්ටිස් ය. ග්රෑම්-ඍණ දඬු, ඩිම්බකෝෂ හැඩය, පැල්ලම් බයිපෝලර්. Motile, කැප්සියුලයක් ඇති, Facultative anaerobes සාදන්න එපා. ඔවුන් සරල පෝෂක මාධ්ය මත හොඳින් වර්ධනය වේ. බොහෝ කාබෝහයිඩ්රේට වායුව නිපදවීමකින් තොරව පැසවීම සිදු වේ. ජනපද වර්ග දෙකක් - තරුණ සහ පරිණත. හකුරු දාර සහිත තරුණ. පරිණත ජනපද විශාල වන අතර දුඹුරු කැට සහිත මධ්‍යයක් සහ හකුරු දාර ඇත.

ජෛව රසායනික ගුණ: ඉහළ සංසිද්ධි ක්‍රියාකාරකම්: සයිලෝස් අම්ලයට පැසවීම, ප්ලාස්මාකොගුලේස් සංශ්ලේෂණය, ෆයිබ්‍රිනොලිසින්, හෙමොලිසින්, ලෙසිතිනේස්, හයිඩ්‍රජන් සල්ෆයිඩ්. ප්රතිජීවක ඖෂධවලට සංවේදී වන අතර ඉහළ උෂ්ණත්වවලදී පරිසරයට අස්ථායී වේ.

සායනික ලක්ෂණ: පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කාලය - පැය කිහිපයක් සිට දින 8 දක්වා. දේශීය ඒවා ඇත - චර්ම-බුබොනික්, බුබොනික්; බාහිරව බෙදා හරින ලද - ප්රාථමික පෙනහළු, ද්විතියික පෙනහළු සහ බඩවැල්; සාමාන්‍යකරණය - ප්‍රාථමික සෙප්ටික්, වසංගතයේ ද්විතියික සෙප්ටික් ආකාර. කලාපීය වසා ගැටිති, enterocolitis, ප්රතික්රියාශීලී ආතරයිටිස්, spondylitis, උණ.

වසංගතවේදය: වසංගතය යනු වන සතුන්ගේ සම්භාව්‍ය ස්වභාවික නාභිගත zoonosis වේ. ස්වභාවධර්මයේ ප්‍රධාන වාහකයන් වන්නේ මාමොට් සහ ගෝෆර්, සහ නාගරික පරිසරයන් - මීයන්. රෝග කාරකය සම්ප්‍රේෂණය වන්නේ මිනිසුන්ට ආසාදනය කළ හැකි සත්ව මැක්කන් මගිනි.

ප්රතිශක්තිය: සෛලීය හාස්යජනක, කාලසීමාව තුළ සීමිතය

ක්ෂුද්ර ජීව විද්යාත්මක රෝග විනිශ්චය:

බැක්ටීරියෝස්කොපි පරීක්ෂාව. ස්මියර් පරීක්ෂණ ද්රව්ය වලින් සකස් කර ඇත, ග්රෑම් සමග පැල්ලම් සහ මෙතිලීන් නිල් ජලීය ද්රාවණයක්. වසංගත බැක්ටීරියා යනු බැක්ටීරියා විද්‍යාත්මක අධ්‍යයනයකි. පරීක්ෂණ ද්රව්ය පෝෂක ආගාර් තහඩු මත එන්නත් කර ඇත. බැක්ටීරියා සුප් හොද්ද මත චිත්රපටයක් සාදයි; බොහෝ සීනි අම්ලයට පැසවීම, ඉන්ඩෝල් සෑදෙන්නේ නැත, ජෙලටින් ද්රවීකරණය නොවේ.

ජෛව විශ්ලේෂණය. විදේශීය මයික්‍රොෆ්ලෝරා වලින් දූෂිත ද්‍රව්‍ය වලින් පිරිසිදු සංස්කෘතියක් හුදකලා කිරීම සඳහා එය සිදු කෙරේ.

ප්‍රකාශිත රසායනාගාර රෝග විනිශ්චය ක්‍රම:

2.RPGA - රතු රුධිර සෛල මත පටවා ඇති ප්‍රතිදේහ සම්මත ප්ලේග් විරෝධී සෙරුමය භාවිතයෙන් ද්‍රව්‍යයේ ඇති බැක්ටීරියා ප්‍රතිදේහජනක හඳුනා ගැනීමට.

ප්‍රතිකාර: ප්‍රතිජීවක වැළැක්වීම: නිශ්චිත වැළැක්වීම - සජීවී දුර්වල වූ වසංගත එන්නත EV.

Plague bacteriophage - Y.pestis හඳුනාගැනීම මත.

Plague වියළි එන්නත යනු වසංගතය වැළැක්වීම සඳහා භාවිතා කරන Y. pestis එන්නත් වික්‍රියා EV හි වියළන ලද සජීවී සංස්කෘතියකි.

ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ගේ වර්ණ ගැන්වීම (ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් මිය යාම) යනු ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ගේ බාහිර හා අභ්‍යන්තර ව්‍යුහය අධ්‍යයනය කිරීමේ ක්‍රම සහ ශිල්පීය ක්‍රම සමූහයකි, ක්ෂුද්‍රජීව විද්‍යාත්මක තාක්‍ෂණයේ ක්‍රමයක් වන අතර එය ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් වර්ග අතර වෙනස හඳුනා ගැනීමට ඔබට ඉඩ සලසයි. මෙම ක්‍රමය ව්‍යවහාරික බැක්ටීරියා විද්‍යාවේ හැඩය, ප්‍රමාණය, ව්‍යුහය, ප්‍රාදේශීයකරණය, ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ගේ සාපේක්ෂ පිහිටීම සහ ඒවායේ අවයවවල ව්‍යුහය තීරණය කිරීම සඳහා බහුලව භාවිතා වේ. පැල්ලම් නොමැතිව, ක්ෂුද්ර ජීවීන්, සමහර දිලීර හැර, ඒවායේ අඩු වෙනස නිසා සැහැල්ලු අන්වීක්ෂයක ප්රායෝගිකව නොපෙනේ. ප්‍රතිකාර කිරීමෙන් පසු, ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ගේ පටල සහ/හෝ ඉන්ද්‍රියයන් පසුබිමට වෙනස් වර්ණයක් ලබා ගනී.

// ක්‍රමය පිළිබඳ සාමාන්‍ය තොරතුරු

ක්ෂුද්‍රජීවී සූදානම රසායනික ප්‍රතික්‍රියාකාරකවලට නිරාවරණය වේ, සාමාන්‍යයෙන් ඩයි හෝ ඔස්මියම් ටෙට්‍රොක්සයිඩ්. වස්තූන්ගේ රසායනික සංයෝග සමඟ සායම් අන්තර්ක්‍රියා කිරීමේ භෞතික රසායනික ක්‍රියාවලියේ ප්‍රති result ලයක් ලෙස, කෘතිමව එයට නිශ්චිත වර්ණයක් ලබා දීම සඳහා, ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් වර්ගය හෝ අවම වශයෙන් එහි පටල වර්ගය තීරණය කළ හැකිය (ග්‍රෑම් පැල්ලම් බලන්න )

ඩයි කිරීමේ ක්‍රම අත්‍යවශ්‍ය, පශ්චාත් වැදගත් සහ negative ණාත්මක ලෙස බෙදා ඇත, දෙවැන්න වැදගත් සහ පශ්චාත් වැදගත් විය හැකිය.

වැදගත් වර්ණ ගැන්වීමේ ක්රමය

අත්‍යවශ්‍ය (අත්‍යවශ්‍ය) සායම් කිරීම සඳහා, මෙතිලීන් සහ ටොලුයිඩින් නිල්, නියුට්‍රල්රොට් සහ කොන්ගෝ රතු 0.2-0.001% ජලීය ද්‍රාවණ භාවිතා කරනු ලබන අතර ඒවා සංස්කෘතියේ තලා දැමූ හෝ එල්ලෙන බිංදු වලට එකතු වේ. මෙම ක්‍රමය මගින් ස්පිරෝචේට් සහ ප්‍රොටෝසෝවා හඳුනා ගනී, බැක්ටීරියා සංචලනය සහ කැප්සියුලයේ ප්‍රතිශක්තිකරණ ඉදිමීම තීරණය කරයි, නමුත් එහි භාවිතය රසායනාගාර දූෂණය බැහැර කරන නීති දැඩි ලෙස පිළිපැදිය යුතුය.

දරු ප්රසූතියෙන් පසු වර්ණ ගැන්වීමේ ක්රම

ස්ථාවර සූදානම (පශ්චාත් වැදගත්) ඩයි කිරීම සඳහා ක්රම සරල හා සංකීර්ණ ලෙස බෙදා ඇත. සරල ක්‍රම වලදී, Pfeiffer fuchsin (විනාඩි 1-2 නිරාවරණය), ක්ෂාරීය මෙතිලීන් නිල් (විනාඩි 3-5) සායම් ද්‍රාවණ ස්ථාවර සූදානමකට යොදන අතර එමඟින් එය සම්පූර්ණයෙන්ම ආවරණය කරයි, සායම් ජලය බැස යයි, සකස් කිරීම සෝදා හරිනු ලැබේ. ජල ධාරාවක්, සොලවා, වියලන ලද සහ අන්වීක්ෂය .
සරල ක්‍රම මඟින් තනි සෛලවල ප්‍රමාණය, හැඩය, ප්‍රාදේශීයකරණය සහ සාපේක්ෂ පිහිටීම විනිශ්චය කිරීමට හැකි වේ, නමුත් ඔවුන්ගේ උපකාරයෙන් ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ගේ ව්‍යුහය සහ බොහෝ විට ඩයි වලට ඒවායේ වෙනස් සම්බන්ධතාවය ස්ථාපිත කළ නොහැක.
බැක්ටීරියා පැල්ලම් කිරීමේ සංකීර්ණ ක්‍රම අතුරින්, අවකලනය කරන ලද ග්‍රෑම් ක්‍රමය, Ziehl - Nelson අනුව අම්ල ප්‍රතිරෝධය නිර්ණය කිරීම, Leffler හෝ Neisser අනුව volutin ධාන්ය තීරණය කිරීම, Romanovsky - Giemsa ක්‍රමය අවකලනය කිරීම, කැප්සියුල තීරණය කිරීමේ negative ණ-ධනාත්මක ක්‍රමය Hins - Burri අනුව, Peshkov හෝ Ziehl අනුව බීජාණු හඳුනා ගැනීම ප්රධාන වශයෙන් භාවිතා වේ - Nelson et al.
ප්රෝටෝසෝවා පැල්ලම් කිරීම සඳහා, Romanovsky-Giemsa ක්රමය සහ hematoxylin-eosin staining භාවිතා කරනු ලැබේ.
හතු අපිරිසිදු හෝ Gram, Ziehl-Nelson, Leffler, Romanovsky-Giemsa ක්රම, මෙන්ම Lugol විසඳුම, lactofuchsin, ආදිය භාවිතයෙන් පරීක්ෂා කරනු ලැබේ.

ග්‍රෑම් ක්‍රමය යනු පර්යේෂණ සඳහා ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් පැල්ලම් කිරීමේ ක්‍රමයකි, බැක්ටීරියාව ඔවුන්ගේ සෛල බිත්තියේ ජෛව රසායනික ගුණාංග මගින් වෙන්කර හඳුනා ගැනීමට ඉඩ සලසයි. 1884 දී ඩෙන්මාර්ක ජාතික වෛද්‍ය ජී කේ ග්‍රෑම් විසින් යෝජනා කරන ලදී.

ග්රෑම් අනුව, බැක්ටීරියා මූලික ඩයි වර්ග - ජෙන්ටියන් හෝ මෙතිල් වයලට් ආදියෙන් වර්ණාලේප කර ඇත, පසුව සායම් අයඩින් ද්රාවණයකින් සවි කර ඇත. වර්ණවත් සූදානම පසුව ඇල්කොහොල් වලින් සෝදාගත් විට, දැඩි ලෙස වර්ණ ගැන්වෙන බැක්ටීරියා වර්ග ග්‍රෑම්-ධනාත්මක බැක්ටීරියා ලෙස හැඳින්වේ - ග්‍රෑම්-ඍණ බැක්ටීරියා (ග්‍රෑම් (-)) මෙන් නොව, සේදූ විට දුර්වර්ණ වේ.

// රෝග විනිශ්චය සඳහා භාවිතා කරන්න

බැක්ටීරියා වර්ගීකරණයේදී මෙන්ම බෝවන රෝග පිළිබඳ ක්ෂුද්‍රජීව විද්‍යාත්මක රෝග විනිශ්චය සඳහා ග්‍රෑම් පැල්ලම් ඉතා වැදගත් වේ.

බැක්ටීරියා වල කොකල් සහ බීජාණු දරණ ආකාර මෙන්ම යීස්ට් ද ග්‍රෑම්-ධනාත්මක වේ, ඒවා නිල්-කළු (තද නිල්) වර්ණයෙන් යුක්ත වේ.

බොහෝ බීජාණු දරණ නොවන බැක්ටීරියා ග්‍රෑම්-ඍණ වේ, ඒවා රතු පැහැයට හැරේ, සෛල න්‍යෂ්ටීන් දීප්තිමත් රතු පැහැයක් ගනී, සහ සයිටොප්ලාස්ම රෝස හෝ තද රතු පාට වේ.

පින්තාරු කිරීමේ තාක්ෂණය

Gram staining යනු සංකීර්ණ වර්ණ ගැන්වීමේ ක්‍රමයක් වන අතර එහිදී වර්ණකයක් සායම් දෙකකට නිරාවරණය වන අතර ඉන් එකක් ප්‍රාථමික වන අතර අනෙක අතිරේක වේ. ඩයි වර්ග වලට අමතරව, සංකීර්ණ පින්තාරු කිරීමේ ක්රම විරංජන කාරක භාවිතා කරයි: මධ්යසාර, අම්ල, ආදිය.

ග්රෑම් පැල්ලම් සඳහා, ට්රයිෆනයිල්මෙතේන් කාණ්ඩයේ ඩයි වර්ග බොහෝ විට භාවිතා වේ: ජෙන්ටියන්, මෙතිල් වයලට් හෝ ස්ඵටික වයලට්. ග්රෑම්-ධනාත්මක ග්රෑම් (+) ක්ෂුද්ර ජීවීන් ඇඟවුම් කරන ලද ඩයි වර්ග සහ අයඩින් සමඟ ශක්තිමත් සම්බන්ධතාවයක් ලබා දෙයි. ඒ අතරම, ඇල්කොහොල් වලට නිරාවරණය වන විට ඒවා දුර්වර්ණ නොවේ, එහි ප්‍රති result ලයක් ලෙස, ග්‍රෑම් ෆුචිසින් (+) සමඟ අතිරේක පැල්ලම් සමඟ ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් ඔවුන්ගේ මුලින් දම් පාට වෙනස් නොකරයි.

ග්රෑම්-ඍණ ග්රෑම් (-) ක්ෂුද්ර ජීවීන් මූලික ඩයි වර්ග සහ අයඩින් සමඟ සංයෝගයක් සාදයි, එය මත්පැන් මගින් පහසුවෙන් විනාශ වේ. එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් දුර්වර්ණ වී පසුව මැජෙන්ටා පැහැයට හැර රතු පැහැයට හැරේ.

පින්තාරු කිරීම සඳහා ද්රව්ය සකස් කිරීම

හොඳින් පිරිහුණු වීදුරු ස්ලයිඩයක මතුපිට තුනී ස්ථරයක් තුළ පරීක්ෂණ ද්රව්ය බෙදා හරිනු ලැබේ. සකස් කරන ලද ස්මෑම් වාතය තුළ වියලන ලද අතර සම්පූර්ණ වියළීමකින් පසුව සවි කර ඇත. පටක කොටස් ෆෝමලින් වල සවි කිරීම සහ පැරෆින් වල තැන්පත් කිරීම, සාමාන්‍ය ශිල්පීය ක්‍රම අනුව හිස්ටොලොජිකල් කොටස් සකස් කර ඇත.

සවි කිරීම

සවි කර ඇති විට, වීදුරු ස්ලයිඩයේ මතුපිට ස්මෑම් සවි කර ඇති අතර, එම නිසා, සකස් කිරීමේ පසුකාලීන පැල්ලම් අතරතුර, ක්ෂුද්ර ජීවී සෛල සෝදා හරිනු නොලැබේ. ඊට අමතරව, මිය ගිය ක්ෂුද්‍රජීවී සෛල ජීවමාන ඒවාට වඩා හොඳින් පැල්ලම් කරයි.

ක්ෂුද්‍රජීවී සෛලයට ඉහළ උෂ්ණත්වයේ බලපෑම මත පදනම් වූ සවි කිරීමේ භෞතික ක්‍රමයක් සහ සයිටොප්ලාස්මික් ප්‍රෝටීන් කැටි ගැසීමට හේතු වන රසායනික ද්‍රව්‍ය භාවිතය ඇතුළත් රසායනික ක්‍රම තිබේ.

සවි කිරීමේ භෞතික ක්රමය

සූදානම සහිත ස්ලයිඩය දකුණු අතේ කරකැවිල්ල හෝ ඇඟිලි I සහ II සමඟ ඉළ ඇට මගින් පහරකින් ඉහළට ගෙන දාහක දැල්ලෙහි ඉහළ කොටසට වඩා 2-3 වතාවක් සුමටව ගෙන යනු ලැබේ. සම්පූර්ණ සවි කිරීමේ ක්රියාවලිය තත්පර 2 කට වඩා වැඩි කාලයක් ගත විය යුතුය.

සවිකිරීමේ විශ්වසනීයත්වය පහත දැක්වෙන ක්රමය මගින් පරීක්ෂා කරනු ලැබේ: වීදුරු ස්ලයිඩයක ස්මාර්-නිදහස් මතුපිට වම් අතෙහි පිටුපස මතුපිටට යොදනු ලැබේ. ආලේපනය නිවැරදිව සවි කර ඇති විට, වීදුරුව උණුසුම් විය යුතුය, නමුත් දැවෙන සංවේදීතාවයක් ඇති නොකරයි.

රසායනික සවි කිරීමේ ක්රමය

ස්මියර් නිවැරදි කිරීම සඳහා, මෙතිල් ඇල්කොහොල්, ඇසිටෝන්, නිකිෆෝරොව් මිශ්‍රණය (එතිල් මධ්‍යසාර 96% සහ නිර්වින්දක ඊතර් මිශ්‍රණය 1: 1 අනුපාතයකින්), කාර්නෝයිගේ දියර (එතිල් මධ්‍යසාර 96% - 60%, ක්ලෝරෝෆෝම් 30%, ග්ලැසියර ඇසිටික් අම්ලය 10%), ඇල්කොහොල් -formol (40% formaldehyde 5 ml, එතිල් මධ්යසාර 96 ° - 95 ml). වියලන ලද ස්මෑම් සහිත ස්ලයිඩයක් විනාඩි 10-15 ක් සවිකරන කාරකයක් සහිත බෝතලයක ගිල්වා වාතයේ වියළනු ලැබේ. තත්පර කිහිපයක් සඳහා 40% formaldehyde වාෂ්ප තුළ සවි කිරීම ද භාවිතා වේ.

පැල්ලම් පැල්ලම් කිරීමේ ක්රියාවලිය

ප්රධාන සායම් වලින් එකක් විනාඩි 2-3 ක් සඳහා ස්ථාවර ස්මෑම් මත වත් කරනු ලැබේ. වර්ෂාපතනය වළක්වා ගැනීම සඳහා, පෙරහන් කඩදාසි හරහා පැල්ලම් කරන්න.

තීන්ත ඉවතට ගෙන පෙරහන් කඩදාසි ප්රවේශමෙන් ඉවත් කරන්න. සකස් කිරීම කළු පැහැයට හැරෙන තෙක් මිනිත්තු 1-2 ක් සඳහා ලුගෝල් ද්‍රාවණය හෝ ග්‍රෑම් අයඩයිඩ් ද්‍රාවණය (පොටෑසියම් අයඩයිඩ් සහ ස්ඵටික අයඩින් 2: 1 අනුපාතයකින් ජලීය ද්‍රාවණයක්) පුරවා ඇත.

ද්‍රාවණය කාන්දු වන අතර, ස්මියර් 96 ° එතිල් මධ්‍යසාර හෝ ඇසිටෝන් වලින් සෝදා හරිනු ලැබේ, ස්මියර් දුර්වර්ණ වන තෙක් සහ ගලා යන දියර පැහැදිලි වන තුරු (තත්පර 20-40-60 පමණ) වත් කර ජලය බැස යයි.

විනාඩි 1-2 ක් ධාවනය වන හෝ ආස්රැත ජලය තුළ වීදුරු හොඳින් සෝදන්න.

බැක්ටීරියා ග්රෑම්-සෘණ කණ්ඩායම හඳුනා ගැනීම සඳහා, සූදානම අතිරේකව fuchsin හෝ safranin (මිනිත්තු 2-5) සමග පැල්ලම් කර ඇත.

ගලා යන ජලයේ සෝදා පෙරහන් කඩදාසිවලින් වියළා ගන්න.

Gram-Weigert අනුව histological අංශවල බැක්ටීරියා පැල්ලම් කිරීමේ තාක්ෂණය

Deparaffinized කොටස් ජලය වෙත ගෙන එනු ලැබේ.

1% ඇසිටික් අම්ලයේ pararosaniline හෝ මූලික fuchsin 1% විසඳුමක් තුළ විනාඩි 20 ක් සායම් කරන්න (ඩයි ද්රාවණය තාපාංකය, සිසිල් කිරීම සහ පෙරීම සඳහා රත් කරනු ලැබේ).

ආස්රැත ජලයෙහි වෙනස්කම් 3 කින් සෝදන්න.

ආස්රැත ජලය තුළ 1% ස්ඵටික වයලට් විනාඩි 5 ක් සඳහා පැල්ලම්.

1% සෝඩියම් ක්ලෝරයිඩ් ද්‍රාවණයකින් ඉක්මනින් සේදීම.

මිශ්‍රණයක තත්පර 30 ක් සඳහා සලකන්න: අයඩින් 1 කොටස + පොටෑසියම් අයඩයිඩ් කොටස් 2 + ආස්රැත ජලය කොටස් 100.

පෙරහන් කඩදාසි සමග බ්ලොට් කරන්න.

ඇනිලීන් සහ සයිලීන් (මිලි ලීටර් 1 - 2) සමාන පරිමාවක මිශ්‍රණයක් කැපීමට යෙදීමෙන් වෙනස් කරන්න; සායම් වලාකුළු කැපීමෙන් ඉවතට ගමන් කිරීම නවත්වන තුරු විසඳුම් සිඳී යයි.

3 xylene වෙනස්කම් හරහා සිදු කරන්න

බෝල්සම් හෝ xylene හි දියකර ඇති ඕනෑම දුම්මලයක් තුළට දමන්න.

ප්රතිඵලය: ග්රෑම්-ධනාත්මක බැක්ටීරියා නිල්-කළු, ෆයිබ්රින් දම් පාට, න්යෂ්ටීන් රතු වේ.

පෙෂ්කොව් ක්‍රමය බැක්ටීරියා එන්ඩොස්පෝර් පැල්ලම් කිරීමට යොදා ගනී.

සායම් කිරීමේ තාක්ෂණය

ග්‍රෑම්-පොසිටිව් බැක්ටීරියා සංස්කෘතියකින් වියළන ලද සූදානමක් කාර්නෝයිගේ දියරයේ මිනිත්තු 15 ක් සවි කර, පසුව ජලයෙන් සෝදා, ලෙෆ්ලර්ගේ මෙතිලීන් නිල් වත් කර වාෂ්ප දිස්වන තෙක් රත් කර, විනාඩි 15-20 ක් තම්බා, සිසිල් කිරීමෙන් පසු සකස් කිරීම සෝදා හරිනු ලැබේ. සහ උදාසීන රතු හෝ Pfeiffer magenta තත්පර 30-60 ක ජලීය ද්රාවණයකින් 0.5% ක ජලීය ද්රාවණයකින් වර්ණාලේප කර ඇත. පෙරහන් කඩදාසි සහ අන්වීක්ෂයකින් වියළන්න.

වර්ණ ගැන්වීමේ ප්රතිඵලය

එහි ප්‍රතිඵලයක් වශයෙන්, පරිණත එන්ඩෝස්පෝර නිල් පැහැයෙන් ද, තරුණ එන්ඩෝස්පෝර තද නිල් පැහැයෙන් ද, සයිටොප්ලාස්මය රතු පැහැයෙන් ද, ක්‍රොමැටින් ධාන්‍ය වයලට් පැහැයෙන් ද වර්ණාලේප කර ඇත.

Ziehl-Neelsen staining ක්‍රමය යනු අම්ල-වේගවත් mycobacteria (ක්ෂය රෝගයේ රෝග කාරක, mycobacteriosis, leprosy), actinomycetes සහ අනෙකුත් අම්ල-වේගවත් ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් හඳුනා ගැනීම සඳහා ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් පැල්ලම් කිරීමේ ක්‍රමයකි. ක්ෂුද්ර ජීවීන්ගේ අම්ල ප්රතිරෝධය ඔවුන්ගේ සෛල තුළ ලිපිඩ, ඉටි සහ හයිඩ්රොක්සි අම්ල තිබීම නිසාය. එවැනි ක්ෂුද්ර ජීවීන් තනුක සායම් විසඳුම් සමඟ දුර්වල ලෙස වර්ණාලේප කර ඇත. ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ගේ සෛල තුළට සායම් විනිවිද යාම පහසු කිරීම සඳහා, සකස් කිරීම සඳහා යොදන සිල් ෆීනෝල් ෆුචින් දාහක දැල්ලක් මත රත් කරනු ලැබේ. ඛනිජ අම්ල සහ මධ්යසාරවල දුර්වල විසඳුම් මගින් වර්ණිත ක්ෂුද්ර ජීවීන් දුර්වර්ණ නොවේ.

මෙම ක්රමය ජර්මානු වෛද්යවරුන් විසින් නම් කර ඇත - ක්ෂුද්ර ජීව විද්යාඥ Franz Ziehl (1857-1926) සහ ව්යාධි විද්යාඥ Friedrich Nelsen (1854-1898), එය 1882-1883 දී වර්ධනය කරන ලදී.

පින්තාරු කිරීමේ අදියර

1. ස්ථාවර ස්මෑම් පැතලි පෙරහන කඩදාසිවලින් ආවරණය කර ඇති අතර Ziehl phenol fuchsin එය මතට වත් කරනු ලැබේ. වාෂ්ප දිස්වන තුරු දාහක දැල්ලක් මත තැවරීම රත් කරනු ලැබේ, පසුව සිසිල් කිරීමට ගෙන ගොස් සායම්වල නව කොටසක් එකතු කරනු ලැබේ. උනුසුම් වීම 2-3 වතාවක් පුනරාවර්තනය වේ. සිසිලනයෙන් පසු, පෙරහන කඩදාසි ඉවත් කර ජලය සමග සූදානම සෝදා ගන්න.

2. සකස් කිරීම ගිල්වීමෙන් හෝ එයට සල්ෆියුරික් අම්ලය හෝ 3% හයිඩ්‍රොක්ලෝරික් අම්ලයේ 5% ද්‍රාවණයක් යෙදීමෙන් අවර්ණ කර ජලයෙන් කිහිප වතාවක් සෝදා ඇත.

3. මිනිත්තු 3-5 ක් සඳහා මෙතිලීන් නිල් ජලීය ඇල්කොහොල් ද්රාවණයකින් සූදානම පැල්ලම් කරන්න, ජලය සමග සෝදා වියළා ගන්න.

Ziehl-Neelsen ක්‍රමය භාවිතයෙන් පැල්ලම් කළ විට, අම්ල-වේගවත් බැක්ටීරියා දැඩි රතු පැහැයක් ලබා ගන්නා අතර මයික්‍රොෆ්ලෝරා වල ඉතිරි කොටස ලා නිල් පැහැයට හැරේ.

Romanovsky-Giemsa staining යනු ප්‍රොටෝසෝවා, බැක්ටීරියා, සෛලීය ව්‍යුහයන් සහ විවිධ වර්ගවල (රුධිරය ඇතුළුව) පටක සැහැල්ලු අන්වීක්ෂය යටතේ පැල්ලම් කිරීමේ සෛල විද්‍යාත්මක ක්‍රමයකි. විවිධ රතු වර්ණවලින් ආම්ලික ආකෘතීන් වර්ණ ගන්වයි, දම් පාට සිට නිල් දක්වා වර්ණවලින් බැසෝෆිලික් සංයුති.

// ඩයි සකස් කිරීම

පැල්ලම් කිරීමට පෙර, නිමි ද්‍රව සායම් ආස්රැත ජලය මිලි ලීටර් 1 කට ඩයි බිංදු 1-2 බැගින් තනුක කරනු ලැබේ. මිනිත්තු 20 - 25 අතර කාලයක් 37 °C උෂ්ණත්වයකදී තෙත් කුටියක (පහළින් තෙත් කළ පෙරනයක් සහිත පෙට්‍රි පිඟානක් වසා ඇත). පැල්ලම් කිරීමෙන් පසු, ස්මියර් ගලා යන ජලයෙන් සෝදා, වාතය වියළා තෙල් ගිල්වීම යටතේ පරීක්ෂා කරනු ලැබේ.

රොමානොව්ස්කි රයිට් තීන්ත මත පදනම් වූ රොමානොව්ස්කි-ගිම්සා සායම් මිශ්‍රණය කුඩු ආකාරයෙන් (වාණිජ සායම්) මෙතිල් මධ්‍යසාර සහ ග්ලිසරින් (ද්‍රාවක මිලි ලීටර් 100 කට ඩයි මිලිග්‍රෑම් 800) සමාන පරිමාවක මිශ්‍රණයක විසුරුවා හරිනු ලැබේ. සායම් හොඳින් දිය නොවේ, එබැවින් මිලි ලීටර් 100 කට මිලිග්‍රෑම් 300 ක ද්‍රාවණයකින් එය ඇඹරීම වඩා හොඳය, ඉන්පසු ඇවිස්සීමත් සමඟ අපේක්ෂිත සාන්ද්‍රණය ලබා ගන්නා තෙක් සායම් එකතු කරන්න. සායම් සකස් කිරීම බොහෝ විට දින කිහිපයක් ගත වේ. රසායනිකව පිරිසිදු මෙතිල් ඇල්කොහොල් සහ ග්ලිසරින් ද්‍රාවක ලෙස භාවිතා කිරීම වැදගත් වේ, මන්ද අපද්‍රව්‍ය සායම්වල ගුණාංග අඩාල කරයි. මෙතිල් මධ්යසාර වෙනුවට, ඔබට 100% එතිල් මධ්යසාර භාවිතා කළ හැකිය. සකස් කළ වර්ණක මිශ්රණය තදින් වසා ඇති භාජනයක සිසිල් වියළි ස්ථානයක ගබඩා කර ඇත.

වර්ණ ගැන්වීමේ තාක්ෂණය

මෙතිල් ඇල්කොහොල් වල සවි කර ඇති ස්මියර් මිනිත්තු 40-120 ක් සඳහා ද්‍රාවණයකින් (සූදානම් දියර තීන්ත මිලි ලීටර් 1 ක් + මූලික බෆර ද්‍රාවණය මිලි ලීටර් 2 ක් + ආස්රැත ජලය මිලි ලීටර් 47 ක්) පැල්ලම් කරනු ලැබේ (පැල්ලම් කිරීමේ කාලසීමාව ආනුභවිකව තෝරා ගනු ලැබේ). ඔවුන් පොස්පේට් බෆරයක් භාවිතා කරයි, නමුත් බෆරයේ pH අගය ස්මියර් වර්ගය මත රඳා පවතී: ඇට මිදුළු සඳහා - 5.8 - 6.0, රුධිර තැලීමක් සඳහා - 6.4 - 6.5, ප්‍රොටෝසෝවා හඳුනා ගැනීම සඳහා - 6.8, මැලේරියා ප්ලාස්මෝඩියම් - 7, 0 - 7.2.

ආස්රැත ජලයෙන් සෝදා, වියළා ගිල්වීම යටතේ පරීක්ෂා කරන්න.

වර්ණ ගැන්වීමේ ප්රතිඵලය

බැක්ටීරියා වයලට්-රතු පැහැයෙන් යුක්ත වන අතර සෛලවල සයිටොප්ලාස්මය නිල් වන අතර න්යෂ්ටීන් රතු වේ. ප්‍රොටෝසෝවා පැල්ලම් කළ විට, ඒවායේ සයිටොප්ලාස්මය නිල් වන අතර ඒවායේ න්‍යෂ්ටීන් රතු-වයලට් බවට පත්වේ.

ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ගේ රූප විද්‍යාව සහ ඒවායේ ව්‍යුහය පිළිබඳ විස්තර අධ්‍යයනය කිරීම සඳහා ඇනිලීන් ඩයි වර්ග සමඟ වර්ණ ගැන්වීමේ ක්‍රමය භාවිතා කරයි. පරීක්ෂණ ද්‍රව්‍ය සමස්ථානික සෝඩියම් ක්ලෝරයිඩ් ද්‍රාවණයකින් හෝ සුප් හොද්දෙන් තනුක කර, කුඩා බිංදුවක් තුනී ස්ථරයක වීදුරු ස්ලයිඩයක් මත විෂ්කම්භය සෙන්ටිමීටර 1 ක ප්‍රදේශයක් පුරා පැතිරී වියළා ඇත. මෙම සූදානම ස්මියර් ලෙස හැඳින්වේ. බැක්ටීරියා පරීක්‍ෂා කරන්නේ නම් එය දාහක දැල්ලක් මත හෝ ප්‍රොටෝසෝවා, රිකට්සියා සහ ස්පිරෝචේට්වල අන්වීක්ෂය සඳහා එතිල් හෝ මෙතිල් ඇල්කොහොල් සමඟ සවි කර ඇත.

ක්ෂුද්‍රජීව විද්‍යාවේදී භාවිතා කරන බොහෝ ඩයි වර්ග දෙකේ ලවණ වේ. ආම්ලික සායම් වලදී, වර්ණ සපයන අයන (ක්‍රෝමෝෆෝර්) අම්ලයක් වන අතර, පැල්ලම් කරන විට, සෛලයේ සෛලීය (මූලික) සංරචක වන ඊසින් වැනි කොටස් සමඟ වඩාත් තීව්‍ර ලෙස බන්ධනය වේ. මූලික සායම් වලදී, වර්ණදේහයක භූමිකාව කැටායනයකින් ඉටු කරයි. පදනමක් ලෙස, එය මෙතිලීන් නිල් වැනි සෛලයේ න්‍යෂ්ටික (ආම්ලික) සංරචක සමඟ වඩාත් තීව්‍ර ලෙස බන්ධනය වේ. සමහර ඩයි වර්ග රසායනික සංයෝග සෑදෙන්නේ නැත, නමුත් හුදෙක් අවට ද්රව්ය මත විසුරුවා හෝ අවක්ෂේප කරයි. වර්ණ ගැන්වීමේ යාන්ත්රණය තුළ රසායනික හා භෞතික ක්රියාවලීන් දෙකම වැදගත් වේ.

බැක්ටීරියාව පැල්ලම් කිරීම සඳහා බහුලව භාවිතා වන ඩයි වර්ග වන්නේ මෙතිල් නිල්, ස්ඵටික වයලට්, මූලික ෆුචින් සහ තයෝනින් ය. මෙතිලීන් නිල්වල ක්ෂාරීය ද්‍රාවණයක් බහුලව භාවිතා වේ - ලෙෆ්ලර් ඩයි, ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ගේ හැඩය සහ ව්‍යුහය පිළිබඳ බොහෝ තොරතුරු හෙළි කිරීමට කෙනෙකුට ඉඩ සලසයි.

කෙසේ වෙතත්, බීජාණු, කැප්සියුල, ෆ්ලැජෙල්ලා, විවිධ ව්‍යුහයන් සහ ඉන්ද්‍රියයන් මෙන්ම සමාන හැඩයේ බැක්ටීරියා හඳුනා ගැනීමට, පැල්ලම් සඳහා එක් ඩයි එකක් පමණක් භාවිතා කිරීම (සරල පැල්ලම් කිරීමේ ක්‍රමයක්) ප්‍රමාණවත් නොවේ. එමනිසා, විවිධ අවශ්යතාවන්ට ගැලපෙන සංකීර්ණ, විශේෂ වර්ණක ක්රම තිබේ.

Gram stain ක්‍රමය මඟින් විවිධ විශේෂ සහ ගණවලට අයත් සමාන හැඩයකින් සහ ප්‍රමාණයේ බැක්ටීරියා වෙන්කර හඳුනා ගැනීමට හැකි වේ. පරීක්ෂණ ද්රව්ය වලින් සකස් කරන ලද ස්මාර්ක් මුලින්ම විනාඩි 1-2 ක් සඳහා ස්ඵටික වයලට් සමග පැල්ලම් කර ඇති අතර, පසුව 1-2 විනාඩි සඳහා Lugol විසඳුම සමඟ. ස්මෑම් වල සියලුම ක්ෂුද්ර ජීවීන් අඳුරු දම් පැහැයක් ලබා ගනී.

මෙයින් පසු, ස්මියර් 96% එතිල් ඇල්කොහොල් සමඟ 30 s-1 විනාඩි සඳහා ප්රතිකාර කරනු ලැබේ, ඉතිරි ඇල්කොහොල් ජලයෙන් සෝදා හරිනු ලැබේ. ඇල්කොහොල් බලපෑම යටතේ සමහර බැක්ටීරියා දුර්වර්ණ වන අතර අනෙක් අය අයඩීන් සමඟ සායම් සංකීර්ණය මගින් ලබා දෙන වයලට් වර්ණය රඳවා ගනී. දම් පැහැය රඳවා තබා ගන්නා එම ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් ග්‍රෑම්-ධනාත්මක ලෙසත්, අවපැහැ ගැන්වෙන ඒවා ග්‍රෑම්-ඍණ ලෙසත් හැඳින්වේ. Fuchsin සමඟ අතිරේක පැල්ලම් කිරීමෙන් පසු, දෙවැන්න රතු පැහැයට හැරේ. ග්රෑම් පැල්ලම් ප්රතිඵල බොහෝ විට සංස්කෘතික තත්ත්වයන් හෝ පැල්ලම් කිරීමේ තාක්ෂණයේ සුළු වෙනස්කම් මගින් බලපාන බව මතක තබා ගත යුතුය. පැරණි සංස්කෘතීන් හෝ ග්රෑම්-ධනාත්මක බැක්ටීරියා වල මිය යන සෛල ග්රෑම්-ඍණ බවට පත් විය හැක. ආම්ලික පරිසරයක, නීතියක් ලෙස, සියලුම ක්ෂුද්ර ජීවීන් ග්රෑම්-ඍණ වේ. ග්රෑම් පැල්ලම් සම්බන්ධයෙන්, සියලුම බැක්ටීරියා කණ්ඩායම් දෙකකට බෙදා ඇත: ග්රෑම්-ධනාත්මක (staphylococci, streptococci, pneumococci, ඇන්ත්රැක්ස් රෝග කාරක, ටෙටනස්, ගෑස් ගැන්ග්රීන්, ආදිය) සහ ග්රෑම්-ඍණ (meningococci, gonococci, typhoid fevers, අතීසාරය, ආදිය) .

ග්රෑම් පැල්ලම් කිරීමේ යාන්ත්රණය තුළ ක්ෂුද්ර ජීවීන්ගේ රසායනික සංයුතියේ ලක්ෂණ, සෛල බිත්තිවල පාරගම්යතාවයේ වෙනස්කම් සහ ග්රෑම්-ධනාත්මක බැක්ටීරියා වල මැග්නීසියම් රයිබොනියුක්ලේට් තිබීම වැදගත් වේ. බොහෝ ග්රෑම්-ධනාත්මක සහ ග්රෑම්-ඍණ බැක්ටීරියා අතර සල්ෆනාමයිඩ්, පෙනිසිලින් සහ ලයිසොසයිම් වලට සංවේදීතාවයේ වෙනස්කම් තිබේ.

ඇසිඩ්-වේගවත් ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් සඳහා Ziehl-Neelsen පැල්ලම් කිරීමේ ක්‍රමය යෝජනා කර ඇත - Mycobacterium tuberculosis සහ leprosy. මෙම ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ට අද්විතීය රසායනික සංයුතියක් ඇත, විශේෂ මේද වැනි ද්‍රව්‍යවල (ඉටි) ඉහළ (30-40% දක්වා) අන්තර්ගතයකින් සංලක්ෂිත වේ. ක්ෂය රෝගියෙකුගේ ස්පුටම් වලින් ස්මෑර් එකක්, කලින් දැල්ලක් මත සවි කර, වාෂ්ප දිස්වන තුරු දෙවරක් හෝ තුන් වතාවක් රත් කළ විට කාබෝල් ෆුචින් ද්‍රාවණයකින් පැල්ලම් කරනු ලැබේ. පෙනෙන විදිහට, ඉටි මෘදු වීම නිසා, තීන්ත සෛලය තුළට විනිවිද යන අතර, 3-5 තත්පර සඳහා 5% සල්ෆියුරික් අම්ලය සමඟ සකස් කිරීම පසුව ප්රතිකාර කිරීමෙන් පසුව පවා එය රඳවා තබා ගනී; එබැවින් අම්ල-වේගවත් mycobacteria රතු පැහැයෙන් පවතී. ඉතිරි ක්ෂුද්‍ර ජීවීන් අම්ලයේ ක්‍රියාකාරිත්වයෙන් දුර්වර්ණ වන අතර අතිරේකව මෙතිලීන් නිල් පැහැයෙන් වර්ණාලේප කළ විට නිල් පැහැයට හැරේ. සාම්ප්‍රදායික පින්තාරු කිරීමේ ක්‍රම සමඟ තීන්ත නොකළ හිස් අවකාශයේ පෙනුමක් ඇති බීජාණු වර්ණ ගැන්වීම සඳහා, මෝඩන්ට් භාවිතා කරනු ලැබේ: අම්ල සහ ක්ෂාර. ඔවුන් ඝන බීජාණු කවචය ලිහිල් කර එය හරහා තීන්ත විනිවිද යාමට පහසුකම් සපයයි. වර්ණ බීජාණු අම්ල-ප්‍රතිරෝධී වන අතර ක්ෂුද්‍රජීවී සෛලයක ශාකමය ශරීරය මෙන් නොව අම්ලයේ බලපෑම යටතේ දුර්වර්ණ නොවේ. එබැවින්, බීජාණු සහ අම්ල-වේගවත් බැක්ටීරියා වර්ණ ගැන්වීමේ මූලධර්මය සමාන වේ. බීජාණු Ziehl-Neelsen ක්රමය (බීජාණු රතු, ශාකමය ශරීරය නිල්) හෝ Ozheshko අනුව පැල්ලම් කළ හැක. මෙය සිදු කිරීම සඳහා, හයිඩ්‍රොක්ලෝරික් හෝ සල්ෆියුරික් අම්ලයේ 0.5% ද්‍රාවණයක බින්දු කිහිපයක් වියළන ලද නමුත් සවි නොකළ ස්මාර් එකකට වත් කර එය උතුරන තෙක් මිනිත්තු 1-2 ක් දාහක දැල්ලක් මත රත් කරන්න. ඉතිරි අම්ලය ඉවතට ගෙන, සකස් කිරීම වියලන ලද අතර, ගින්නක් තුළ සවි කර ඇත. තවදුරටත් වර්ණ ගැන්වීම Ziehl-Nielsen ක්රමය භාවිතයෙන් සිදු කෙරේ.

සාම්ප්‍රදායික පැල්ලම් කිරීමේ ක්‍රම සමඟ කැප්සියුල අවර්ණ ලෙස පවතී. ඉන්ද්‍රිය ස්මෑම් සහ පටක තරලවල ක්ෂුද්‍ර ජීවීන්ගේ කැප්සියුල හඳුනා ගැනීම සඳහා සරල පැල්ලම් කිරීමේ ක්‍රම භාවිතා කිරීමට මෙය ඉඩ සලසයි. නිදසුනක් ලෙස, මෙතිලීන් නිල් පැහැයෙන් වර්ණාලේප කරන විට, බැක්ටීරියා වල පටක සහ සෛල නිල් පැහැයෙන් වර්ණාලේප කර ඇති අතර, අවර්ණ කලාපයක් වන කැප්සියුලය බැක්ටීරියාව වටා පවතී. විශේෂ පැල්ලම් කිරීමේ ක්‍රම අතුරින්, බුරි ක්‍රමය භාවිතා කරනු ලැබේ: තීන්ත බිංදුවක් සහ පරීක්ෂණ ද්‍රව්‍ය බිංදුවක් වීදුරුවේ අද්දරට යොදනු ලැබේ, මිශ්‍ර කර, ආලේපයක් සාදනු ලැබේ (ලේ තැවරීමක් මෙන්), වියළා අන්වීක්ෂයකින්. ගිල්වීමේ පද්ධතියක්. සූදානමේ පසුබිම අඳුරු දුම් වර්ණයෙන් වර්ණාලේප කර ඇත;

ඍණාත්මක ක්රමය G සහ a නොවන තීන්ත සහ මැජෙන්ටා සමඟ පින්තාරු කිරීම ඒකාබද්ධ කරයි. ස්මියර් බුරී ක්‍රමය භාවිතයෙන් පැල්ලම් කර, පසුව වියළා, ඇල්කොහොල් සමඟ සවි කර Ziehl fuchsin සමඟ පැල්ලම් කර ඇත. සකස් කිරීමේ පසුබිම කළු ය, කැප්සියුලය වර්ණවත් නොවේ, බැක්ටීරියා සෛලය රතු ය.

ඩිප්තෙරියා ව්යාධිජනක සෛලවල පිහිටා ඇති Volutin ධාන්ය වර්ග Neisser staining භාවිතයෙන් හඳුනා ගැනේ. මෙම සංකීර්ණ පැල්ලම් කිරීමේ ක්‍රමයට අදියර කිහිපයක් ඇතුළත් වේ: ඇසිටික් අම්ලය නිල් (මිනිත්තු 1-2) සමඟ දාහක දැල්ල මත සවි කර ඇති සූදානම පින්තාරු කිරීම, ඉන්පසු ලුගෝල් ද්‍රාවණයේ බින්දු කිහිපයක් මිනිත්තු 1 ක් සඳහා ආලේප කර ජලයෙන් සේදීම. සකස් කිරීම විනාඩි 2-3 ක් සඳහා chrysoidin හෝ vesuvin ද්රාවණයකින් වර්ණාලේප කර, ජලය සමග සෝදා, වියලන ලද සහ අන්වීක්ෂීය පරීක්ෂාවට ලක් වේ. Volutin ධාන්ය නිල් පැහැයෙන් වර්ණාලේප කර ඇත, ක්ෂුද්ර ජීවී සෛල - ලා දුඹුරු. ෆ්ලැජෙල්ලා වර්ණ ගැන්වීමේ ක්‍රම වන්නේ ඒවා මත ටැනින් තැන්පත් වීමයි, එය මෝඩන්ට් ලෙස ක්‍රියා කරයි, එනම්, එය පින්තාරු කරන වස්තුවේ සායම් සවි කිරීමට උපකාරී වේ (ලීෆ්සන් ක්‍රමය).

Romanovsky-Giemsa ක්‍රමය ප්‍රෝටෝසෝවා මෙන්ම ස්පයිරෝචෙට් සහ රිකට්සියා පැල්ලම් කිරීම සඳහා බහුලව භාවිතා වේ. භාවිතා කරන ඩයි යනු azure, eosin සහ methylene blue මිශ්‍රණයකි. භාවිතයට පෙර, එය 1: 10 අනුපාතයකින් ආසවනය කළ හෝ නළ ජලය (pH 7.0-7.2) සමඟ විසුරුවා හරිනු ලැබේ. ඖෂධය විනාඩි 5-15 අතර කාලයක් එතිල් හෝ මෙතිල් මධ්යසාර සමඟ සවි කර, විනාඩි 30-40 අතර කාලයක් පැල්ලම් කර, වියලන ලද සහ අන්වීක්ෂීයව පරීක්ෂා කර ඇත. ප්‍රොටෝසෝවා න්‍යෂ්ටිය, ෆ්ලැජෙල්ලා සහ බ්ලෙෆරොප්ලාස්ට් දීප්තිමත් රතු පැහැයෙන් වර්ණාලේප කර ඇත, සයිටොප්ලාස්මය නිල්, ස්පිරෝචෙට් සහ රිකට්සියා ලිලැක්-නිල් හෝ රෝස පැහැයෙන් වර්ණාලේප කර ඇත.

Feulgen ප්‍රතික්‍රියාව සහ එහි වෙනස් කිරීම් භාවිතයෙන් ක්ෂුද්‍රජීවී සෛලවල DNA පවතින බව තීරණය කළ හැක. මෙම ක්‍රමය පදනම් වී ඇත්තේ න්‍යෂ්ටික ද්‍රව්‍ය ෂිෆ්ගේ ප්‍රතික්‍රියාකාරකය සමඟ ප්‍රතිකාර කළ විට තද දම් පැහැයට හැරීමේ හැකියාව මත ය (ෆුචින් සල්ෆියුරස් අම්ලය සමඟ වර්ණ ගන්වා ඇත). පෙර-ස්ථාවර ස්මාර් උණුසුම් (60 ° C) 1 N සමඟ ප්රතිකාර කරනු ලැබේ. හයිඩ්‍රොක්ලෝරික් අම්ලයේ ද්‍රාවණය විනාඩි 7-8 ක් සඳහා RNA විනාශ කිරීමට (හයිඩ්‍රොලිස් කිරීමට), විශේෂයෙන් බැක්ටීරියා වල පැවතීම DNA හඳුනා ගැනීම දුෂ්කර කරයි. ඔබට විශේෂ එන්සයිම රයිබොනියුක්ලීස් සමඟ ආර්එන්ඒ විනාශ කළ හැකි අතර, රොමානොව්ස්කි (අසුර් I-II සහ eosin) විසින් යෝජනා කරන ලද ඩයි වර්ග වර්ණ ගැන්වීම සඳහා භාවිතා කළ හැකිය.

1. Sinev අනුව සකස් කිරීම මත කඩදාසි කැබැල්ලක් තබා ජල බිංදු කිහිපයක් හෝ ජෙන්ටියන් වයලට් විසඳුමක් යොදන්න. මිනිත්තු 1-2 ක් තීන්ත ආලේප කරන්න. කඩදාසි ඉවත් කරන්න හෝ සායම් ඉවතට ගන්න.

2. ජලය සමග සේදීමකින් තොරව, එය කළු (විනාඩි 1) බවට පත් වන තෙක් ලුගෝල්ගේ විසඳුම යොදන්න, පසුව සායම් ජලය බැස යයි.

3. ජලයෙන් සේදීමකින් තොරව, ඩයි ඉවත් වන තුරු (තත්පර 30-60) 96% ඇල්කොහොල් යොදන්න. ඔබට තත්පර 1-2 ක් සඳහා මත්පැන් වීදුරුවක ඖෂධය ගිල්විය හැකිය.

4. ජලය සමග සූදානම සෝදන්න.

5. මිනිත්තු 3 ක් සඳහා Pfeiffer fuchsin සමඟ අවසන් කරන්න, ජලය සමග සෝදා වියළා ගන්න.

1. ස්ථාවර සූදානම පෙරහන් කඩදාසිවලින් ආවරණය කර ඇති අතර Ziehl fuchsin යොදනු ලැබේ. වීදුරුව කරකැවිල්ලකින් අල්ලාගෙන, වාෂ්ප මුදා හරින තෙක් drug ෂධය දාහක දැල්ල මත රත් කරනු ලැබේ. සායම්වල නව කොටසක් එකතු කර තවත් 2 වතාවක් රත් කරන්න. සිසිලනයෙන් පසු, කඩදාසි ඉවත් කර ජලය සමග සූදානම සෝදා ගන්න.

2. සකස් කිරීම සල්ෆියුරික් අම්ලයේ 5% ක ද්‍රාවණයකින් වර්ණ ගැන්වීම, ද්‍රාවණය තුළ 2-3 වතාවක් ගිල්වීම හෝ වීදුරුව මත අම්ලය වත් කිරීම, පසුව ජලය සමග කිහිප වතාවක් සේදීම.

3. මිනිත්තු 3-5 ක් සඳහා මෙතිලීන් නිල්වල ජලීය-මධ්යසාර ද්රාවණයකින් පැල්ලම් කරන්න, ජලය සමග සෝදා වියළා ගන්න.

ගිල්වීමේ පද්ධතියක් භාවිතා කරන අන්වීක්ෂය.

1. කළු තීන්ත බින්දුවක්, 10 වතාවක් තනුක කර, වීදුරු ස්ලයිඩයකට යොදනු ලැබේ. ඒකට සංස්කෘතිය බිංදුවක් එකතු වෙනවා. ඇඹරුම් වීදුරුවක දාරය භාවිතා කරමින්, ලේ තැවරීමක් මෙන් මදයක් සාදා වියළා ගනී.

2. මධ්යසාර හෝ sublimate සමග රසායනිකව ස්ථාවර. ජලය සමග ප්රවේශමෙන් සේදීම.

3. 3-5 විනාඩි සඳහා Pfeiffer fuchsin සමග පැල්ලම්. ප්රවේශමෙන් සෝදා වාතය වියළා ගන්න.

අවධානය! සකස් කිරීම හානි නොකිරීමට පෙරහන කඩදාසි භාවිතා නොකරන්න.

සංකීර්ණ පින්තාරු කිරීමේ ක්රම

සංස්කාරක තේරීම