Պաթոգենի մաքուր մշակույթի մեկուսացման մեթոդներ. Բջիջների քանակի որոշումը պինդ սննդարար միջավայրի վրա ցանելու միջոցով (Կոխի ափսեի մեթոդ)

Pasteur մեթոդը Koch մեթոդը Կենսաբանական ֆիզիկական

(ունի պատմական (շերտավոր)

իմաստ) էլեկտրալարեր) Շչուկևիչի քիմիական մեթոդ

Ժամանակակից

Ցանք ցանքսով Ցանք սպաթուլայով

(Դրիգալսկու մեթոդ)

Մաքուր մշակույթների մեկուսացման մեթոդներ (սխեմա 11).

1. Մեխանիկական արձակման մեթոդներհիմնված են մանրէների բաժանման վրա՝ ագարի մակերևույթի վրա փորձարկման նյութի հաջորդական քսման միջոցով:

Ա) Պաստերի մեթոդը– ունի պատմական նշանակություն, նախատեսում է փորձարկման նյութի հաջորդական նոսրացում հեղուկ սննդարար միջավայրում՝ գլանման մեթոդով.

բ) Կոխի մեթոդ– ափսեի մեթոդ – հիմնված է փորձարկման նյութի հաջորդական նոսրացման վրա միս-պեպտոն ագարով, որին հաջորդում է փորձանոթները նոսրացված նյութով Petri ափսեների մեջ:

V) Դրիգալսկու մեթոդ– միկրոֆլորայով առատորեն աղտոտված նյութ ցանելիս օգտագործեք 2-3 բաժակ սպաթուլայի միջոցով հաջորդական ցանելու համար:

է) Զուգահեռ հարվածներով օղակով ցանքս.

2. Կենսաբանական մեթոդներհիմնված պաթոգենների կենսաբանական հատկությունների վրա:

Ա) Կենսաբանական- բարձր զգայուն կենդանիների վարակ, որտեղ մանրէները արագորեն բազմանում և կուտակվում են: Որոշ դեպքերում այս մեթոդը միակն է, որը թույլ է տալիս հիվանդ մարդուց մեկուսացնել պաթոգեն կուլտուրան (օրինակ՝ տուլարեմիայով), այլ դեպքերում՝ ավելի զգայուն (օրինակ՝ սպիտակ մկների մեջ պնևմոկոկի մեկուսացում կամ հարուցիչ։ Գվինեա խոզերի տուբերկուլյոզը):

բ) Քիմիական– հիմնված է միկոբակտերիաների թթվային դիմադրության վրա: Նյութը ուղեկցող ֆլորայից ազատելու համար այն
բուժվում է թթվային լուծույթով: Կաճեն միայն տուբերկուլյոզի բացիլները, քանի որ թթվակայուն միկրոբները մահանում են թթվի ազդեցության տակ։

V) Ֆիզիկական մեթոդհիմնված է սպորների ջերմության դիմադրության վրա: Սպոր առաջացնող բակտերիաների մշակույթը մեկուսացնելու համար
խառնուրդներ, նյութը տաքացվում է 80°C-ում և պատվաստվում սննդարար միջավայրի վրա: Միայն սպոր բակտերիաները կաճեն, քանի որ նրանց սպորները կենդանի են մնացել և առաջացրել են աճ:

է) Շչուկևիչ մեթոդ– հիմնված է Proteus vulgaris-ի բարձր շարժունակության վրա, որը կարող է սողացող աճ առաջացնել:

Գաղութներից թեք ագարի և MPB-ի վրա ցանելու եղանակ.

Ա) Գաղութներից տեղափոխում ագարի թեք

Թեթևակի բացեք ափսեի կափարիչը, կալցինացված, սառեցված օղակով հանեք առանձին գաղութի մի մասը, բացեք փորձանոթը ստերիլ թեք ագարով, այն պահելով ձեր ձախ ձեռքում թեքված դիրքով, որպեսզի կարողանաք դիտել մածուկի մակերեսը։ միջին. Մշակույթի հետ հանգույցը տեղափոխեք փորձանոթի մեջ՝ առանց պատերին դիպչելու, քսեք այն սննդարար միջավայրի վրա՝ սահելով մակերևույթի երկայնքով փորձանոթի մի եզրից մյուսը, հարվածները բարձրացնելով մինչև միջավայրի վերին մասը՝ շերտավոր սերմնացան: Փորձանոթը փակվում է, և առանց բաց թողնելու, ստորագրվում է պատվաստված միկրոբի անվանումը և պատվաստման ամսաթիվը:

բ) Գաղութից տեղափոխում միս-պեպտոն արգանակ

MPB-ի վրա ցանելու տեխնիկան հիմնականում նույնն է, ինչ պինդ միջավայրի վրա ցանելու ժամանակ: ՄՊԲ-ի վրա ցանելիս նյութով օղակը ընկղմվում է միջավայրի մեջ։ Եթե ​​նյութը մածուցիկ է և հնարավոր չէ հեռացնել օղակից, այն քսում են անոթի պատին, այնուհետև լվանում հեղուկ միջավայրով: Հեղուկ նյութը, որը հավաքվում է ստերիլ Pasteur կամ աստիճանավոր պիպետտով, լցվում է սննդարար միջավայրի մեջ:

Անկախ աշխատանքի արդյունքում ուսանողը պետք է իմանա.

1. Միկրոօրգանիզմների մաքուր մշակույթի մեկուսացման մեթոդներ

2. Միկրոօրգանիզմների մշակման մեթոդներ

Ի վիճակի լինել:

1. Հակահամաճարակային ռեժիմի կանոններին և անվտանգության նախազգուշական միջոցները պահպանելու հմտություններ

2. Ախտահանել նյութը, ախտահանել ձեռքերը

3. Պատրաստել պատրաստուկներ բակտերիալ գաղութներից

4. Մանրադիտակի գաղութներ

5. Գրամ բիծ միկրոօրգանիզմներ

ԴԱՍ 8

ԱՌԱՐԿԱ. Մաքուր մշակույթների մեկուսացման մեթոդներ (շարունակություն):Բակտերիաների ֆերմենտային ակտիվությունը և դրա ուսումնասիրման մեթոդները.

Եթե ​​բույսերի վրա առկա որոշակի ախտանիշների և մանրադիտակային հետազոտության արդյունքների հիման վրա կասկածվում է, որ հիվանդության հարուցիչը մանրէ է, ապա հաջորդ քայլը պետք է լինի նրա մեկուսացումը:

Այս դեպքում ենթադրվում է, որ հարուցիչը վարակված է ուղեկցող օրգանիզմներով, այսինքն՝ կա խառը պոպուլյացիա։ Առանձին աճող գաղութի ձևով հարուցիչը ստանալու համար հյուսվածքի մակերատը պետք է շերտավորել միջավայրի վրա:

Հպումով ցանելը. Օգտագործելով կալցինացված պատվաստման օղակ, վերցրեք բակտերիաներ պարունակող բուսական հյուսվածքի մացերատ և թեթև շարժումներով, առանց ագարի մակերեսը վնասելու, 4-6 հարված քսեք պատրաստված սննդարար միջավայրին: Օղակը նորից կալցինացնելով՝ միջակով գավաթը 90°-ով թեքվում է դեպի աջ և այնուհետև երկրորդ հարվածից կատարվում է ևս 4-6 հարված, ասեղը նորից կալցինացվում է և կատարվում երրորդ ցանքը։ Դրանով ստացվում է սկզբնական նյութի այնպիսի նոսրացում, որ բակտերիաները, 48-72 ժամ թերմոստատում 28 °C-ում ինկուբացիայից հետո, ձևավորում են տարբեր ձևերի և գույների առանձին գաղութներ: Այնուհետև գաղութները տեղափոխվում են ագարի թեք խողովակներ՝ հետագա հետազոտության համար: Օգտագործելով կալցինացված օղակ, վերցրեք գաղութ և կիրառեք այն սննդարար ագարի վրա՝ զգույշ շարժումով օձի կամ զիգզագի տեսքով:

Koch հորդառատ մեթոդ. Կոխի ափսեի մեթոդը երաշխավորում է, որ յուրաքանչյուր գաղութ ձևավորվում է մեկ բակտերիալ բջջից: Լավագույնն այն է, որ սկզբնական նյութից կախոց պատրաստել ստերիլ ջրի մեջ և օգտագործել Կոխի մեթոդը միայն այս նոսրացումով: Կախոցի փոքր քանակությունը տեղափոխվում է առաջին փորձանոթի մեջ՝ մինչև 60 °C սառեցված սննդարար միջավայրով: Այնուհետեւ խողովակի պարունակությունը խառնվում է պատվաստանյութի հետ՝ պտտելով այն ափերի միջեւ։ Այնուհետև վերցրեք երկրորդ փորձանոթը, զգուշորեն բացեք այն այրիչի կրակի վրա և օգտագործեք մեծ օղակներ՝ հիմքի երեք հատվածը դրա մեջ առաջին փորձանոթից տեղափոխելու համար: Պարանոցն ու խցանը կրակելուց հետո փորձանոթի պարունակությունը լցնում են առաջին Պետրի ափսեի մեջ՝ բացելով ափսեի կափարիչը այնքան, որ փորձանոթի պարանոցը մտցվի տակը։ Լցնելուց անմիջապես հետո փակեք գավաթը և զգուշորեն համաչափ բաշխեք սնուցող միջավայրը։

Երկրորդ փորձանոթի պարունակությունը մանրակրկիտ խառնելուց հետո վերցրեք երրորդ փորձանոթը և երկրորդից վեց բաժին բլոկով տեղափոխեք դրա մեջ: Փորձանոթի պարունակությունը լցնում են բաժակի մեջ, իսկ փորձանոթի պարունակությունը խառնելուց հետո լցնում են բաժակի մեջ։ Միջինով կերակրատեսակները ինկուբացվում են 28°C ջերմաստիճանի թերմոստատում, մի քանի օր հետո սկզբնական նյութում պարունակվող բակտերիաները գաղութներ են կազմում։

Սերիական բուծում. Եթե, օրինակ, անհրաժեշտ է հողից մանրէներ մեկուսացնել, ապա օգտագործվում է սերիական նոսրացում։ Ստերիլ սնուցող միջավայրը (15 մլ մեկ բաժակի համար) լցվում է բաժակների մեջ, կախոցի վերջին երեք նոսրացումներից 0,1 մլ կիրառվում է կարծրացած ագարի վրա և ապակե սպաթուլայի միջոցով տարածվում է մակերեսի վրա։

Բակտերիաները մեկուսացնելու համար 1 գ հողը կախում են 9 մլ ջրի մեջ, լավ թափահարում, թույլ տալիս մի քանի վայրկյան նստել և կախոցից պատրաստվում են սերիական նոսրացումներ։ Օգտագործելով այս մեթոդը, յուրաքանչյուր նմուշում կարելի է որոշել միկրոօրգանիզմների քանակը:

Եթե ​​սխալ եք գտնում, խնդրում ենք ընդգծել տեքստի մի հատվածը և սեղմել Ctrl+Enter.

77288 0

Բակտերիաների մշակութային հատկությունները

Գաղութը նույն տեսակի բջիջների մեկուսացված հավաքածու է, որն աճել է մեկ բջիջից (բջիջների կլոն): Կախված նրանից, թե որտեղ է աճում միկրոօրգանիզմը (խիտ սննդային միջավայրի մակերեսին կամ դրա հաստությամբ), առանձնանում են մակերեսային, խորը և ստորին գաղութները։

Միջավայրի մակերեսին աճեցված գաղութները բազմազան են. դրանք հատուկ են տեսակներին, և դրանց ուսումնասիրությունն օգտագործվում է ուսումնասիրվող մշակաբույսի տեսակները որոշելու համար:

Գաղութները նկարագրելիս հաշվի են առնվում հետևյալ բնութագրերը.
1) գաղութի ձևը` կլոր, ամեբոիդ, ռիզոիդ, անկանոն և այլն.

2) գաղութի չափը (տրամագիծը) - շատ փոքր (սրածայր) (0,1-0,5 մմ), փոքր (0,5-3 մմ), միջին (3-5 մմ) և մեծ (ավելի քան 5 մմ տրամագծով);

3) գաղութի մակերեսը հարթ է, կոպիտ, ծալքավոր, կնճռոտ, համակենտրոն շրջանակներով կամ շառավղով գծավոր.

4) գաղութային պրոֆիլը` հարթ, ուռուցիկ, կոնաձև, խառնարանաձև և այլն.

5) թափանցիկություն - ձանձրալի, փայլատ, փայլուն, թափանցիկ, փոշի;

6) գաղութի գույնը (գունանյութ) - անգույն կամ պիգմենտային (սպիտակ, դեղին, ոսկեգույն, կարմիր, սև), հատկապես նշեք պիգմենտի արտազատումը միջավայրի մեջ իր գունավորմամբ.

7) գաղութի եզրը՝ հարթ, ալիքաձև, ատամնավոր, ծոպերով և այլն.

8) գաղութային կառուցվածքը` միատարր, նուրբ կամ խոշորահատիկ, շերտավոր. Գաղութի եզրը և կառուցվածքը որոշվում են խոշորացույցի միջոցով կամ մանրադիտակի ցածր խոշորացմամբ՝ մանրադիտակի սեղանի վրա դնելով Petri ափսե՝ պատվաստումով, կափարիչով ներքեւ.

9) գաղութի հետեւողականությունը. գաղութը կարող է լինել խիտ, փափուկ, աճող ագարի, լորձաթաղանթ (ձգվում է օղակի հետևում), փխրուն (հեշտությամբ կոտրվում է հանգույցի հետ շփվելիս):

Խորը գաղութներն ամենից հաճախ նման են քիչ թե շատ հարթեցված ոսպին (օվալաձև ձև՝ սրածայր ծայրերով), երբեմն՝ բամբակյա բուրդի կտորներ՝ թելերի նման ելուստներով դեպի սննդարար միջավայր։ Խորը գաղութների ձևավորումը հաճախ ուղեկցվում է խիտ միջավայրի խզմամբ, եթե միկրոօրգանիզմները գազ են թողնում:

Ներքևի գաղութները սովորաբար նման են բարակ թափանցիկ թաղանթների, որոնք տարածվում են հատակի երկայնքով:

Գաղութի բնութագրերը կարող են փոխվել տարիքի հետ, դրանք կախված են միջավայրի բաղադրությունից և մշակման ջերմաստիճանից։

Հեղուկ սննդարար միջավայրում միկրոօրգանիզմների աճը հաշվի է առնվում ստացիոնար պայմաններում աճեցված չորսից յոթ օր տևողությամբ կուլտուրաների միջոցով:

Հեղուկ սննդարար միջավայրում միկրոօրգանիզմների աճով նկատվում է միջավայրի պղտորություն և թաղանթի կամ նստվածքի առաջացում։

Կիսահեղուկ (0,5-0,7% ագար) սնուցող միջավայրի վրա աճեցնելիս շարժական մանրէներն առաջացնում են ընդգծված պղտորություն, անշարժ ձևերն աճում են միայն ցանքի ժամանակ՝ միջավայրի մեջ ներարկվելով։

Հաճախ մանրէների աճը ուղեկցվում է հոտի առաջացմամբ, շրջակա միջավայրի պիգմենտացմամբ, գազի արտազատմամբ։ Որոշ տեսակի բակտերիաների կուլտուրաներին բնորոշ հոտը կապված է տարբեր էսթերների (էթիլացետատ, ամիլացետատ և այլն), ինդոլի, մերկապտանի, ջրածնի սուլֆիդի, սկաթոլի, ամոնիակի, բութիրաթթվի ձևավորման հետ։

Պիգմենտներ ձևավորելու ունակությունը բնորոշ է բազմաթիվ տեսակի միկրոօրգանիզմների: Պիգմենտների քիմիական բնույթը բազմազան է՝ կարոտինոիդներ, անտոցիանիններ, մելանիններ։ Եթե ​​պիգմենտը ջրի մեջ անլուծելի է, ապա միայն մշակութային սալիկը ներկված է. եթե այն լուծելի է, սննդային միջավայրը նույնպես գունավոր է դառնում: Ենթադրվում է, որ պիգմենտները պաշտպանում են բակտերիաները արևի լույսի վնասակար ազդեցությունից, ինչի պատճառով օդում շատ պիգմենտային բակտերիաներ կան, բացի այդ, պիգմենտները ներգրավված են այդ միկրոօրգանիզմների նյութափոխանակության մեջ:

Բնության մեջ կան այսպես կոչված ֆոսֆորեսցենտ բակտերիաներ, որոնց մշակույթները մթության մեջ փայլում են կանաչավուն կապտավուն կամ դեղնավուն լույսով։ Նման բակտերիաները հիմնականում հանդիպում են գետի կամ ծովի ջրում։ Լուսավոր բակտերիաները՝ ֆոտոբակտերիաները, ներառում են աերոբ բակտերիաներ (վիբրիոներ, կոկիներ, ձողեր):

Միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացում

Ուսումնասիրվող նյութը (ջուր, հող, օդ, սնունդ կամ այլ առարկաներ) սովորաբար պարունակում է մանրէների ասոցիացիաներ:

Մաքուր մշակույթի մեկուսացումը հնարավորություն է տալիս ուսումնասիրել մորֆոլոգիական, մշակութային, կենսաքիմիական, հակագենային և այլ բնութագրերը, որոնց ամբողջությունը որոշում է հարուցչի տեսակը և տեսակը, այսինքն՝ կատարվում է նրա նույնականացումը:

Միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրաները մեկուսացնելու համար օգտագործվում են մեթոդներ, որոնք կարելի է բաժանել մի քանի խմբերի.
1. Պաստերի մեթոդ - փորձարկման նյութի հաջորդական նոսրացում հեղուկ սննդային միջավայրում մինչև մեկ բջջի կոնցենտրացիան ծավալում (պատմական նշանակություն ունի):

2. Կոխի մեթոդ («ափսեի միացում») - փորձարկման նյութի հաջորդական նոսրացում հալած ագարի մեջ (ջերմաստիճանը 48-50 C), որին հաջորդում է լցնել Պետրիի ամանների մեջ, որտեղ ագարը պնդանում է: Պատվաստումները, որպես կանոն, կատարվում են վերջին երեք-չորս նոսրացումներից, որտեղ բակտերիաները քիչ են դառնում, իսկ ավելի ուշ, երբ դրանք աճում են Պետրիի ափսեների վրա, առաջանում են մեկուսացված գաղութներ՝ առաջացած մեկ սկզբնական մայր բջջից։ Ագարի խորքում գտնվող մեկուսացված գաղութներից բակտերիաների մաքուր մշակույթ է ստացվում ենթամշակույթով թարմ միջավայրի վրա:

3. Շուկևիչի մեթոդ - օգտագործվում է Proteus-ի և «սողացող» աճով այլ միկրոօրգանիզմների մաքուր կուլտուրա ստանալու համար: Փորձարկման նյութը պատվաստվում է կոնդենսացիոն ջրի մեջ ագարի թեքության հիմքում: Շարժական միկրոբները (Proteus) ունակ են բարձրանալ թեք ագարով, իսկ անշարժ ձևերը մնում են աճելու ներքևում՝ ցանքի վայրում: Մշակույթի վերին եզրերը ցանելով՝ դուք կարող եք մաքուր մշակույթ ստանալ:

4. Դրիգալսկու մեթոդ - լայնորեն կիրառվում է մանրէաբանական պրակտիկայում, երբ ուսումնասիրվող նյութը նոսրացվում է փորձանոթի մեջ ստերիլ աղի լուծույթով կամ արգանակով։ Նյութի մեկ կաթիլը ավելացվում է առաջին գավաթին և ստերիլ ապակե սպաթուլայի միջոցով տարածվում է միջավայրի մակերեսի վրա: Այնուհետեւ նույն սպաթուլայով (առանց այրիչի կրակի մեջ այրելու) նույն ցանքը կատարվում է երկրորդ և երրորդ գավաթներում։

Բակտերիաների յուրաքանչյուր պատվաստման ժամանակ ավելի ու ավելի քիչ է մնում սպաթուլայի վրա, և երրորդ բաժակի վրա ցանելիս բակտերիաները կբաշխվեն սննդային միջավայրի մակերեսի վրա՝ միմյանցից առանձին: Սպասքը թերմոստատում (կախված միկրոօրգանիզմների աճի տեմպերից) 1-7 օր պահելուց հետո, երրորդ ճաշատեսակի վրա յուրաքանչյուր բակտերիա արտադրում է բջիջների կլոն՝ ձևավորելով մեկուսացված գաղութ, որը ենթամշակվում է թեք ագարի վրա՝ կուտակվելու համար։ մաքուր մշակույթ:

5. Վայնբերգի մեթոդ. Առանձնահատուկ դժվարություններ են առաջանում պարտադիր անաէրոբների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման ժամանակ: Եթե ​​մոլեկուլային թթվածնի հետ շփումը անմիջապես չի հանգեցնում բջիջների մահվան, ապա սերմնավորումն իրականացվում է Դրիգալսկու մեթոդի համաձայն, բայց դրանից հետո սպասքն անմիջապես տեղադրվում է աներոստատի մեջ: Այնուամենայնիվ, ավելի հաճախ օգտագործվում է բուծման մեթոդը: Դրա էությունը կայանում է նրանում, որ ուսումնասիրվող նյութի նոսրացումը կատարվում է հալած և սառեցված մինչև 45-50 oC ագարային սննդարար միջավայրում:

Կատարվում է 6-10 հաջորդական նոսրացում, այնուհետև փորձանոթներում գտնվող միջավայրն արագ սառչում է և մակերեսը ծածկում պարաֆինի և նավթային ժելեի խառնուրդի շերտով, որպեսզի օդը չներթափանցի սննդարար միջավայրի հաստության մեջ: Երբեմն սննդային միջավայրը, ցանքից և խառնելուց հետո, տեղափոխվում է ստերիլ Burri խողովակների կամ մազանոթ Pasteur պիպետների մեջ, որոնց ծայրերը կնքվում են: Հաջող նոսրացման դեպքում անաէրոբների մեկուսացված գաղութները աճում են փորձանոթներում, Բուրի խողովակներում և Պաստերի պիպետներում: Ապահովելու համար, որ մեկուսացված գաղութները հստակ տեսանելի են, օգտագործվում են հստակեցված սննդանյութեր:

Անաէրոբների մեկուսացված գաղութներ հանելու համար խողովակը թեթևակի տաքացնում են՝ պտտելով այն կրակի վրա, մինչդեռ պատերին հարող ագարը հալվում է, և խողովակի պարունակությունը ագարի սյունակի տեսքով դուրս է սահում ստերիլ Պետրի ափսեի մեջ: Ագարի սյունը կտրված է ստերիլ պինցետով, իսկ գաղութները հանվում են օղակով: Արդյունահանված գաղութները տեղադրվում են մեկուսացված միկրոօրգանիզմների զարգացման համար բարենպաստ հեղուկ միջավայրում: Ագարի միջավայրը դուրս է մղվում Բուրրի խողովակից՝ գազն անցկացնելով բամբակյա խրոցակի միջով:

6. Հունգաթի մեթոդ. Երբ նրանք ցանկանում են ձեռք բերել թթվածնի նկատմամբ հատկապես բարձր զգայունությամբ բակտերիաների մեկուսացված գաղութներ (խիստ աերոբներ), կիրառվում է Հունգաթի պտտվող խողովակի մեթոդը։ Դրա համար հալած ագարի միջավայրը պատվաստվում է բակտերիաներով մշտական ​​հոսանքով թթվածնի կեղտից ազատված իներտ գազի փորձանոթի միջոցով: Խողովակը այնուհետև կնքվում է ռետինե խցանով և տեղադրվում է հորիզոնական սեղմակի մեջ, որը պտտում է խողովակը; միջավայրը հավասարաչափ բաշխվում է փորձանոթի պատերի վրա և ամրանում բարակ շերտի մեջ: Գազային խառնուրդով լցված փորձանոթում բարակ շերտի օգտագործումը թույլ է տալիս ձեռք բերել մեկուսացված գաղութներ, որոնք հստակ տեսանելի են անզեն աչքով:

7. Առանձին բջիջների մեկուսացում միկրոմանիպուլյատորի միջոցով: Միկրոմանիպուլյատորը սարք է, որը թույլ է տալիս հեռացնել մեկ բջիջ կախոցից՝ օգտագործելով հատուկ միկրոպիպետ կամ միկրոշրջան: Այս գործողությունը վերահսկվում է մանրադիտակի տակ: Մանրադիտակի բեմի վրա տեղադրվում է խոնավ խցիկ, որի մեջ տեղադրվում է կախված կաթիլային պատրաստուկը։ Գործող ստենդների պահարաններում ամրացվում են միկրոպիպետներ (միկրոպոփեր), որոնց շարժումը մանրադիտակի տեսադաշտում իրականացվում է միկրոն ճշգրտությամբ՝ պտուտակների և լծակների համակարգի շնորհիվ։ Հետազոտողը, մանրադիտակով նայելով, միկրոպիպետներով հեռացնում է առանձին բջիջները և դրանք տեղափոխում ստերիլ հեղուկ միջավայր պարունակող խողովակների մեջ՝ բջջային կլոն ստանալու համար:

Լ.Վ. Տիմոշենկո, Մ.Վ. Չուբիկ

Հատուկ միջավայրեր.

Մանրէաբանության մեջ լայնորեն օգտագործվում են արդյունաբերական արտադրության չոր սննդանյութեր, որոնք հիգրոսկոպիկ փոշիներ են, որոնք պարունակում են միջավայրի բոլոր բաղադրիչները, բացի ջրից: Դրանց պատրաստման համար օգտագործվում են էժան ոչ պարենային ապրանքների տրիպտային մարսողություններ (ձկան թափոններ, մսային և ոսկրային ալյուր, տեխնիկական կազեին)։ Դրանք հարմար են փոխադրման համար, կարող են երկար պահվել, լաբորատորիաներին ազատել կրիչներ պատրաստելու հսկայական գործընթացից և մոտեցնել մեդիայի ստանդարտացման խնդրի լուծմանը։ Բժշկական արդյունաբերությունը արտադրում է չոր միջավայր Էնդո, Լևին, Պլոսկիրև, բիսմութ սուլֆիտ ագար, սննդարար ագար, ածխաջրեր՝ BP ցուցիչով և այլն։

Թերմոստատներ

Թերմոստատները օգտագործվում են միկրոօրգանիզմների մշակման համար։

Թերմոստատը սարք է, որը պահպանում է մշտական ​​ջերմաստիճանը: Սարքը բաղկացած է ջեռուցիչից, խցիկից, կրկնակի պատերից, որոնց միջև շրջանառվում է օդը կամ ջուրը։ Ջերմաստիճանը կարգավորվում է թերմոստատով։ Միկրոօրգանիզմների մեծ մասի բազմացման համար օպտիմալ ջերմաստիճանը 37°C է։

ԴԱՍ 7

ԹԵՄԱ՝ ԱԵՐՈԲԵՆԵՐԻ ՄԱՔՈՒՐ ՄՇԱԿՈՒՅԹԻ ՄԵԿՈՒՑՄԱՆ ՄԵԹՈԴՆԵՐ. ՄԵԽԱՆԻԿԱԿԱՆ ԴԻՍՈՑԻԱՑՄԱՆ ՄԵԹՈԴՈՎ ԱԵՐՈԲԻԿ ԲԱԿՏԵՐԻԱՅԻ ՄԱՔՈՒՐ ԿՈՒՇՏՈՒԹՅԱՆ ՄԵԿՈՒՑՄԱՆ ՔԱՅԼԵՐԸ.

Դասի պլան

1. Բակտերիաների «մաքուր կուլտուրա» հասկացությունը

2. Մաքուր մշակույթների մեխանիկական տարանջատման մեկուսացման մեթոդներ

3. Մաքուր մշակույթների մեկուսացման կենսաբանական մեթոդներ

4. Բակտերիաների նույնականացման մեթոդներ

Դասի նպատակը.Աշակերտներին ծանոթացնել մաքուր մշակույթների մեկուսացման տարբեր մեթոդներին, սովորեցնել ցանել օղակով, հարվածներով և ներարկումով.

Ցույցի ուղեցույցներ

Իրենց բնական միջավայրում բակտերիաները հանդիպում են ասոցիացիաներում: Մանրէների հատկությունները և դրանց դերը պաթոլոգիական պրոցեսի զարգացման մեջ որոշելու համար անհրաժեշտ է ունենալ բակտերիաներ միատարր պոպուլյացիաների (մաքուր կուլտուրաների) տեսքով։ Մաքուր մշակույթը միևնույն տեսակի բակտերիալ անհատների հավաքածու է՝ աճեցված սննդարար միջավայրի վրա:

Աերոբ բակտերիաների մաքուր կուլտուրաների մեկուսացման մեթոդներ

Pasteur մեթոդը Koch մեթոդը Կենսաբանական ֆիզիկական

(ունի պատմական (ափսե լարեր)

Իմաստը)

Քիմիական մեթոդ

Շչուկևիչ

Ժամանակակից

Ցանք ցանքսով Ցանք սպաթուլայով

(Դրիգալսկու մեթոդ)

Մաքուր մշակույթների մեկուսացման մեթոդներ.

1. Մեխանիկական տարանջատման մեթոդները հիմնված են մանրէների տարանջատման վրա՝ փորձարկման նյութի հաջորդական քսման միջոցով ագարի մակերեսին:

ա) Պաստերի մեթոդ - ունի պատմական նշանակություն, նախատեսում է փորձարկման նյութի հաջորդական նոսրացում հեղուկ սննդային միջավայրում գլանման մեթոդով.

բ) Կոխի մեթոդը՝ թիթեղային մեթոդը, հիմնված է փորձարկման նյութի հաջորդական նոսրացման վրա մսային պեպտոն ագարով, որին հաջորդում է նոսրացված նյութով փորձանոթները Petri ափսեների մեջ:

գ) Դրիգալսկու մեթոդ - միկրոֆլորայով առատորեն սերմացվող նյութ ցանելիս օգտագործել 2-3 բաժակ հաջորդական ցանքի համար սպաթուլայի միջոցով:

դ) Օղակով ցանքը զուգահեռ հարվածներով.

2. Կենսաբանական մեթոդները հիմնված են հարուցիչների կենսաբանական հատկությունների վրա:

ա) Կենսաբանական - բարձր զգայուն կենդանիների վարակ, որտեղ մանրէները արագորեն բազմանում և կուտակվում են. Որոշ դեպքերում այս մեթոդը միակն է, որը թույլ է տալիս հիվանդ մարդուց մեկուսացնել պաթոգեն մշակույթը (օրինակ՝ տուլարեմիայի դեպքում), մյուս դեպքերում՝ ավելի զգայուն (օրինակ՝ սպիտակ մկների կամ պնևմոկոկի մեկուսացումը։ Գվինեա խոզերի տուբերկուլյոզի հարուցիչը):

բ) Քիմիական – հիմնված է միկոբակտերիաների թթվային դիմադրության վրա: Նյութը ուղեկցող ֆլորայից ազատելու համար այն
բուժվում է թթվային լուծույթով: Կաճեն միայն տուբերկուլյոզի բացիլները, քանի որ թթվակայուն միկրոբները մահանում են թթվի ազդեցության տակ։

գ) Ֆիզիկական մեթոդը հիմնված է սպորների ջերմության դիմադրության վրա: Սպոր առաջացնող բակտերիաների մշակույթը մեկուսացնելու համար
խառնուրդներ, նյութը տաքացվում է 80°C-ում և պատվաստվում սննդարար միջավայրի վրա: Միայն սպոր բակտերիաները կաճեն, քանի որ նրանց սպորները կենդանի են մնացել և առաջացրել են աճ:

դ) Շչուկևիչի մեթոդը - հիմնված է Proteus vulgaris-ի բարձր շարժունակության վրա, որը կարող է սողացող աճ առաջացնել:

Ագարի ափսեի պատրաստման եղանակը

MPA-ն հալեցնում են ջրային բաղնիքում, այնուհետև սառչում մինչև 50-55°C: Շշի պարանոցն այրվում է սպիրտային լամպի բոցի մեջ, Պետրիի ամանները բացում են այնպես, որ շշի վզիկը տեղավորվի առանց սպասքի եզրերին դիպչելու, մեջը լցնում են 10-15 մլ ՄՊԱ, կափարիչը՝ փակվում է, ուտեստը թափահարում են այնպես, որ կրիչը հավասարաչափ բաշխվի և թողնում հորիզոնական մակերեսի վրա, մինչև պնդանա։ Չորացնելուց հետո ափսե ագարի թիթեղները պահվում են սառը վիճակում:

Օղակի ցանքս

Ստերիլ սառեցված օղակի օգնությամբ վերցրեք նյութի մի կաթիլ, ձախ ձեռքով բացեք բաժակի մի ծայրը, օղակը բերեք ներս և մի քանի հարված կատարեք մի տեղում՝ հակառակ եզրին գտնվող օղակով, ապա պոկեք օղակը և պատվաստեք: նյութը զուգահեռ հարվածներով գավաթի մի եզրից մյուսը 5-6 մմ ընդմիջումով: Ցանման սկզբում, երբ օղակի վրա շատ մանրէներ կան, դրանք միաձուլված աճ են տալիս, բայց յուրաքանչյուր հարվածի դեպքում օղակի վրա ավելի ու ավելի քիչ մանրէներ են հայտնվում, և նրանք կմնան միայնակ և կստեղծեն մեկուսացված գաղութներ:

Ցանք՝ ըստ Դրիգալսկու մեթոդի

Այս մեթոդը կիրառվում է միկրոֆլորայով (թարախ, կղանք, թուք) խիստ աղտոտված նյութի պատվաստման ժամանակ: Դրիգալսկու մեթոդով ցանելու համար վերցրեք սպաթուլա և մի քանի բաժակ (3-4): Սփաթուլան մետաղյա մետաղալարից կամ ապակյա տեգից պատրաստված գործիք է՝ թեքված եռանկյունի կամ L-ի ձևով: Առաջին բաժակի մեջ նյութը մտցնում են օղակով կամ պիպետտով և սպաթուլայի միջոցով հավասարաչափ բաշխվում միջավայրի մակերեսի վրա, նույն սպաթուլայով, առանց այն այրելու, նյութը քսում են երկրորդ բաժակի սննդային միջավայրի մեջ, այնուհետև երրորդում։ Նման ցանքով առաջին գավաթը կունենա միաձուլվող աճ, իսկ հաջորդ գավաթներում կաճեն առանձին գաղութներ։

Մանրէաբանության, վիրուսաբանության և իմունոլոգիայի զարգացման հիմնական փուլերը

Դրանք ներառում են հետևյալը.

1.Էմպիրիկ գիտելիքներ(մինչև մանրադիտակների գյուտը և դրանց օգտագործումը միկրոաշխարհն ուսումնասիրելու համար):

J. Fracastoro (1546) առաջարկել է կենդանի բնույթը գործակալների վարակիչ հիվանդությունների - contagium vivum.

2.Մորֆոլոգիական ժամանակաշրջանտևեց մոտ երկու հարյուր տարի:

Անտոնի վան Լևենհուկը 1675 թ առաջին անգամ նկարագրել են նախակենդանիները, 1683 թվականին՝ բակտերիաների հիմնական ձևերը։ Գործիքների (X300 մանրադիտակների առավելագույն խոշորացում) և միկրոաշխարհի ուսումնասիրման մեթոդների անկատարությունը չեն նպաստել միկրոօրգանիզմների մասին գիտական ​​գիտելիքների արագ կուտակմանը։

3.Ֆիզիոլոգիական շրջան(1875 թվականից) - Լ.Պաստերի և Ռ.Կոխի դարաշրջանը։

Լ.Պաստեր - ֆերմենտացման և քայքայման գործընթացների մանրէաբանական հիմքերի ուսումնասիրություն, արդյունաբերական մանրէաբանության զարգացում, բնության մեջ նյութերի շրջանառության մեջ միկրոօրգանիզմների դերի պարզաբանում, բացահայտում. անաէրոբմիկրոօրգանիզմներ, սկզբունքների մշակում ասեպսիս,մեթոդները ստերիլիզացում,թուլացում ( թուլացում)վիրուլենտությունև ստանալը պատվաստանյութեր (պատվաստանյութերի շտամներ).

Ռ.Կոխ - մեկուսացման մեթոդ մաքուր մշակույթներպինդ սննդային միջավայրերի վրա, բակտերիաների անիլինային ներկանյութերով ներկելու մեթոդներ, սիբիրյան խոցի, խոլերայի հարուցիչների հայտնաբերում ( Կոխ ստորակետ), տուբերկուլյոզ (Կոխի ձողիկներ),մանրադիտակի տեխնիկայի կատարելագործում. Հենլե չափանիշների փորձարարական հիմնավորում, որը հայտնի է որպես Հենլե-Կոխ պոստուլատներ (եռյակ):

4.Իմունաբանական շրջան.

Ի.Ի.Մեխնիկովը «մանրէաբանության պոետ» է Էմիլ Ռուի փոխաբերական սահմանման համաձայն: Նա ստեղծել է մանրէաբանության նոր դարաշրջան՝ իմունիտետի (իմունիտետի) ուսմունք՝ զարգացնելով ֆագոցիտոզի տեսությունը և հիմնավորելով իմունիտետի բջջային տեսությունը։

Միաժամանակ, տվյալներ են կուտակվել օրգանիզմում արտադրության մասին հակամարմիններբակտերիաների և դրանց դեմ տոքսիններ,ինչը թույլ է տվել Պ.Էրլիխին զարգացնել իմունիտետի հումորային տեսությունը։ Ֆագոցիտային և հումորալ տեսությունների կողմնակիցների միջև հետագա երկարատև և բեղմնավոր քննարկման ընթացքում բացահայտվեցին իմունիտետի բազմաթիվ մեխանիզմներ և ծնվեց գիտությունը. իմունոլոգիա.

Հետագայում պարզվեց, որ ժառանգական և ձեռքբերովի անձեռնմխելիությունը կախված է հինգ հիմնական համակարգերի համակարգված գործունեությունից՝ մակրոֆագներ, կոմպլեմենտ, T- և B-լիմֆոցիտներ, ինտերֆերոններ, հիմնական հիստոմատատիլ համակարգ, որոնք ապահովում են իմունային պատասխանի տարբեր ձևեր: Ի.Ի.Մեխնիկովը և Պ.Էրլիխը 1908 թ. շնորհվել է Նոբելյան մրցանակ։

1892 թվականի փետրվարի 12 Ռուսաստանի գիտությունների ակադեմիայի նիստում Դ.Ի. Իվանովսկին զեկուցել է, որ ծխախոտի խճանկարի հիվանդության հարուցիչը զտվող վիրուսն է: Այս ամսաթիվը կարելի է համարել ծննդյան օր վիրուսաբանություն, իսկ Դ.Ի.Իվանովսկին դրա հիմնադիրն է։ Հետագայում պարզվեց, որ վիրուսները հիվանդություններ են առաջացնում ոչ միայն բույսերի, այլև մարդկանց, կենդանիների և նույնիսկ բակտերիաների մոտ։ Այնուամենայնիվ, միայն այն բանից հետո, երբ հաստատվեցին գենի բնույթը և գենետիկ կոդը, վիրուսները դասակարգվեցին որպես կենդանի բնություն:

5. Մանրէաբանության զարգացման հաջորդ կարեւոր փուլն էր հակաբիոտիկների հայտնաբերում. 1929 թ Ա. Ֆլեմինգը հայտնաբերեց պենիցիլինը և սկսվեց հակաբիոտիկ թերապիայի դարաշրջանը, ինչը հանգեցրեց հեղափոխական առաջընթացի բժշկության մեջ: Հետագայում պարզվեց, որ մանրէները հարմարվում են հակաբիոտիկներին, և դեղերի դիմադրության մեխանիզմների ուսումնասիրությունը հանգեցրեց երկրորդի հայտնաբերմանը. արտաքրոմոսոմային (պլազմիդային) գենոմըբակտերիաներ.

Ուսումնասիրելով պլազմիդներցույց տվեց, որ դրանք նույնիսկ ավելի պարզ կառուցվածք ունեցող օրգանիզմներ են, քան վիրուսները, և ի տարբերություն բակտերիոֆագներչվնասել բակտերիաներին, այլ ապահովել նրանց լրացուցիչ կենսաբանական հատկություններ: Պլազմիդների հայտնաբերումը զգալիորեն ընդլայնել է կյանքի գոյության ձևերի և նրա էվոլյուցիայի հնարավոր ուղիների ըմբռնումը։

6. Ժամանակակից մոլեկուլային գենետիկական փուլՄանրէաբանության, վիրուսաբանության և իմունոլոգիայի զարգացումը սկսվել է 20-րդ դարի երկրորդ կեսից՝ կապված գենետիկայի և մոլեկուլային կենսաբանության նվաճումների, էլեկտրոնային մանրադիտակի ստեղծման հետ։

Բակտերիաների վրա կատարված փորձերն ապացուցել են ԴՆԹ-ի դերը ժառանգական հատկանիշների փոխանցման գործում: Բակտերիաների, վիրուսների և ավելի ուշ պլազմիդների օգտագործումը որպես մոլեկուլային կենսաբանության և գենետիկական հետազոտության առարկաներ հանգեցրել է կյանքի հիմքում ընկած հիմնարար գործընթացների ավելի խորը ըմբռնմանը: Բակտերիաների ԴՆԹ-ում գենետիկական տեղեկատվության կոդավորման սկզբունքների հստակեցումը և գենետիկ կոդի ունիվերսալության հաստատումը հնարավորություն տվեց ավելի լավ հասկանալ ավելի բարձր կազմակերպված օրգանիզմներին բնորոշ մոլեկուլային գենետիկական օրինաչափությունները:

Escherichia coli-ի գենոմի վերծանումը հնարավորություն է տվել նախագծել և փոխպատվաստել գեները: Հիմիկվանից Գենային ինժեներիանստեղծեց նոր ուղղություններ կենսատեխնոլոգիա.

Բազմաթիվ վիրուսների մոլեկուլային գենետիկական կազմակերպումը և բջիջների հետ նրանց փոխազդեցության մեխանիզմները վերծանվել են, հաստատվել են վիրուսային ԴՆԹ-ի զգայուն բջջի գենոմում ինտեգրվելու ունակությունը և վիրուսային քաղցկեղի առաջացման հիմնական մեխանիզմները:

Իմունոլոգիան իրական հեղափոխության է ենթարկվել՝ դուրս գալով վարակիչ իմունոլոգիայի շրջանակներից և դառնալով ամենակարևոր հիմնարար բժշկական և կենսաբանական առարկաներից մեկը: Մինչ օրս իմունոլոգիան գիտություն է, որն ուսումնասիրում է ոչ միայն պաշտպանությունը վարակներից: Ժամանակակից իմաստով Իմունոլոգիան գիտություն է, որն ուսումնասիրում է օրգանիզմի ինքնապաշտպանության մեխանիզմները գենետիկորեն օտար ամեն ինչից՝ պահպանելով մարմնի կառուցվածքային և ֆունկցիոնալ ամբողջականությունը։

Իմունոլոգիան ներկայումս ներառում է մի շարք մասնագիտացված ոլորտներ, որոնցից ինֆեկցիոն իմունոլոգիայի հետ մեկտեղ առավել նշանակալից են իմունոգենետիկան, իմունոմորֆոլոգիան, փոխպատվաստման իմունոլոգիան, իմունոպաթոլոգիան, իմունոհեմատոլոգիան, օնկոիմունոլոգիան, օնտոգենեզի իմունոլոգիան, պատվաստանյութը և կիրառական իմունախտորոշումը:

Մանրէաբանություն և վիրուսաբանություն, ինչպես հիմնական կենսաբանական գիտություններներառում են նաև մի շարք անկախ գիտական ​​առարկաներ՝ իրենց նպատակներով և խնդիրներով. ընդհանուր, տեխնիկական (արդյունաբերական), գյուղատնտեսական, անասնաբուժական և մարդկության համար ամենակարևորը բժշկական մանրէաբանություն և վիրուսաբանություն։

Բժշկական մանրէաբանությունը և վիրուսաբանությունը ուսումնասիրում են մարդու վարակիչ հիվանդությունների հարուցիչները (դրանց մորֆոլոգիան, ֆիզիոլոգիան, էկոլոգիան, կենսաբանական և գենետիկական բնութագրերը), մշակում դրանց մշակման և նույնականացման մեթոդներ, դրանց ախտորոշման, բուժման և կանխարգելման հատուկ մեթոդներ: