Njia za kutenganisha utamaduni safi wa pathojeni. Uamuzi wa idadi ya seli kwa kupanda kwenye media dhabiti ya virutubishi (njia ya sahani ya Koch)

Njia ya Pasteur Njia ya Koch ya Biolojia ya Kimwili

(ina kihistoria (lamellar)

maana) wiring) Njia ya Kemikali ya Shchukevich

Kisasa

Kupanda kwa kitanzi Kupanda kwa spatula

(Njia ya Drigalski)

Mbinu za kutenganisha tamaduni safi (Mpango 11):

1. Njia za kutolewa kwa mitambo zinatokana na mgawanyo wa vijidudu kwa kusugua kwa mpangilio wa nyenzo za mtihani juu ya uso wa agar.

A) Njia ya Pasteur- ina umuhimu wa kihistoria, hutoa dilution ya mlolongo wa nyenzo za jaribio katika njia ya virutubishi kioevu kwa kutumia njia ya kukunja.

b) Mbinu ya Koch- Njia ya sahani - kulingana na dilution ya mlolongo wa nyenzo za jaribio na agar ya peptoni ya nyama, ikifuatiwa na kumwaga mirija ya majaribio na nyenzo iliyochemshwa kwenye vyombo vya Petri.

V) Mbinu ya drigalski- wakati wa kupanda nyenzo zilizochafuliwa sana na microflora, tumia vikombe 2-3 kwa kupanda kwa mpangilio na spatula.

G) Kupanda kwa kitanzi katika viboko sambamba.

2. Mbinu za kibiolojia kulingana na mali ya kibiolojia ya pathogens.

A) Kibiolojia- Maambukizi ya wanyama nyeti sana, ambapo vijidudu huongezeka haraka na kujilimbikiza. Katika baadhi ya matukio, njia hii ndiyo pekee ambayo inaruhusu kutenganisha utamaduni wa pathojeni kutoka kwa mtu mgonjwa (kwa mfano, na tularemia), katika hali nyingine ni nyeti zaidi (kwa mfano, kutenganisha pneumococcus katika panya nyeupe au wakala wa causative. ya kifua kikuu katika nguruwe za Guinea).

b) Kemikali- kwa kuzingatia upinzani wa asidi ya mycobacteria. Ili kufungia nyenzo kutoka kwa mimea inayoandamana, ni
kutibiwa na suluhisho la asidi. Bacilli ya kifua kikuu tu itakua, kwani vijidudu visivyo na asidi vilikufa chini ya ushawishi wa asidi.

V) Mbinu ya kimwili kulingana na upinzani wa spores kwa joto. Kutenga utamaduni wa bakteria wanaotengeneza spora kutoka
mchanganyiko, nyenzo huwashwa kwa 80 ° C na kuingizwa kwenye kati ya virutubisho. Bakteria ya spore tu ndio itakua, kwani spores zao zilibaki hai na zilisababisha ukuaji.

G) Njia ya Shchukevich- inatokana na uhamaji mkubwa wa Proteus vulgaris, yenye uwezo wa kutoa ukuaji wa kutambaa.

Njia ya kupandikiza tena kutoka kwa makoloni kwenye agar iliyoinama na MPB:

A) Uhamisho kutoka kwa makoloni hadi agar slant

Fungua kifuniko cha sahani kidogo, ondoa sehemu ya koloni tofauti na kitanzi kilichochomwa, kilichopozwa, fungua bomba la mtihani na agar isiyo na kuzaa, ukiishika kwa mkono wako wa kushoto kwa nafasi ya kutega, ili uweze kutazama uso wa uso. kati. Kuhamisha kitanzi na utamaduni ndani ya bomba la mtihani bila kugusa kuta, kusugua juu ya kati ya virutubisho, sliding kando ya uso kutoka makali moja ya tube mtihani hadi nyingine, kuinua viboko hadi juu ya kati - streak mbegu. Bomba la mtihani limefungwa na, bila kuruhusu, jina la microbe iliyoingizwa na tarehe ya chanjo husainiwa.

b) Kuhamisha kutoka kwa koloni hadi mchuzi wa nyama-peptoni

Mbinu ya kuweka upya kwenye MPB kimsingi ni sawa na wakati wa kupanda kwenye media dhabiti. Wakati wa kupanda kwenye MPB, kitanzi kilicho na nyenzo juu yake kinaingizwa ndani. Ikiwa nyenzo ni viscous na haziwezi kuondolewa kwenye kitanzi, hupigwa kwenye ukuta wa chombo na kisha kuosha na kati ya kioevu. Nyenzo za kioevu, zilizokusanywa na Pasteur ya kuzaa au pipette iliyohitimu, hutiwa ndani ya kati ya virutubisho.

Kama matokeo ya kazi ya kujitegemea, mwanafunzi anapaswa kujua:

1. Njia za kutenganisha utamaduni safi wa microorganisms

2. Njia za kukuza microorganisms

Kuwa na uwezo wa:

1. Ujuzi katika kuzingatia sheria za serikali ya kupambana na janga na tahadhari za usalama

2. Disinfect nyenzo, disinfect mikono

3. Kuandaa maandalizi kutoka kwa makoloni ya bakteria

4. Makoloni ya hadubini

5. Gram stain microorganisms

SOMO LA 8

SOMO. Njia za kutenganisha tamaduni safi (inaendelea). Shughuli ya enzyme ya bakteria na njia za kuisoma.

Ikiwa, kwa kuzingatia dalili fulani kwenye mimea na matokeo ya uchunguzi wa microscopic, inashukiwa kuwa wakala wa causative wa ugonjwa huo ni bakteria, hatua inayofuata inapaswa kuwa kuitenga.

Katika kesi hiyo, inachukuliwa kuwa pathogen huchafuliwa na viumbe vinavyoandamana, yaani, kuna mchanganyiko wa watu. Ili kupata pathojeni kwa namna ya koloni tofauti inayokua, macerate ya tishu inapaswa kupigwa kwenye kati.

Kupanda kwa kugusa. Kutumia kitanzi cha chanjo kilicho na calcined, chukua kiasi kidogo cha macerate ya tishu za mimea iliyo na bakteria na, pamoja na harakati za mwanga, bila kuharibu uso wa agar, tumia viboko 4-6 kwenye kati ya virutubisho iliyoandaliwa. Baada ya kuhesabu tena kitanzi, kikombe kilicho na kati kinageuka 90 ° kwenda kulia na kisha viboko vingine 4-6 vinatumiwa kutoka kwa kiharusi cha pili, sindano hupigwa tena na kupanda kwa tatu kunafanywa. Hii inafanikisha upunguzaji wa nyenzo za kuanzia hivi kwamba bakteria, baada ya kuingizwa kwenye thermostat kwa masaa 48-72 kwa 28 ° C, huunda makoloni ya kibinafsi ya maumbo na rangi mbalimbali. Kisha makoloni huhamishiwa kwenye mirija ya agar slant kwa uchunguzi zaidi. Kutumia kitanzi cha calcined, chukua koloni na uitumie kwenye agar ya virutubisho na harakati za makini kwa namna ya nyoka au zigzag.

Njia ya kumwaga Koch. Njia ya sahani ya Koch inahakikisha kwamba kila koloni huundwa kutoka kwa seli moja ya bakteria. Ni bora kuandaa kusimamishwa kutoka kwa nyenzo za kuanzia kwenye maji yenye kuzaa na kutumia njia ya Koch tu na dilution hii. Kiasi kidogo cha kusimamishwa huhamishiwa kwenye bomba la majaribio la kwanza na kati ya virutubishi kilichopozwa hadi 60 °C. Kisha yaliyomo ya bomba huchanganywa na inoculum kwa kuizungusha kati ya mitende. Ifuatayo, chukua bomba la pili la majaribio, uifungue kwa uangalifu juu ya mwali wa moto, na utumie vitanzi vikubwa kuhamisha sehemu tatu za substrate ndani yake kutoka kwa bomba la kwanza la majaribio. Baada ya kurusha shingo na kizuizi, yaliyomo kwenye bomba la mtihani hutiwa kwenye sahani ya kwanza ya Petri, kufungua kifuniko cha sahani ya kutosha kuingiza shingo ya bomba la mtihani chini yake. Mara baada ya kumwaga, funga kikombe na usambaze kwa makini kati ya virutubisho sawasawa.

Baada ya kuchanganya kabisa yaliyomo kwenye bomba la pili la majaribio, chukua bomba la tatu la mtihani na uhamishe sehemu sita za substrate kutoka kwa pili ndani yake na kitanzi. Yaliyomo ya bomba la mtihani hutiwa ndani ya kikombe, na yaliyomo ya bomba la mtihani, baada ya kuchanganya, hutiwa ndani ya kikombe. Sahani zilizo na kati huingizwa kwenye thermostat saa 28 ° C baada ya siku chache, bakteria zilizomo kwenye makoloni ya nyenzo za kuanzia.

Ufugaji wa serial. Ikiwa, kwa mfano, ni muhimu kutenganisha bakteria kutoka kwenye udongo, basi dilution ya serial hutumiwa. Kati ya virutubishi vya kuzaa (15 ml kwa kikombe) hutiwa ndani ya vikombe, 0.1 ml ya dilutions tatu za mwisho za kusimamishwa hutumiwa kwa agar ngumu na kuenea juu ya uso na spatula ya kioo.

Ili kutenganisha bakteria, 1 g ya udongo imesimamishwa katika 9 ml ya maji, imetikiswa vizuri, inaruhusiwa kukaa kwa sekunde chache, na dilutions za serial zimeandaliwa kutoka kwa kusimamishwa. Kutumia njia hii, idadi ya microorganisms katika kila sampuli inaweza kuamua.

Ukipata hitilafu, tafadhali onyesha kipande cha maandishi na ubofye Ctrl+Ingiza.

77288 0

Tabia za kitamaduni za bakteria

Coloni ni mkusanyiko wa pekee wa seli za aina moja ambazo zilikua kutoka kwa seli moja (clone of cells). Kulingana na mahali ambapo microorganism inakua (juu ya uso wa kati ya virutubisho mnene au katika unene wake), uso, makoloni ya kina na ya chini yanajulikana.

Makoloni yaliyopandwa kwenye uso wa kati ni tofauti: ni ya spishi mahususi na utafiti wao hutumiwa kuamua aina ya zao linalochunguzwa.

Wakati wa kuelezea koloni, sifa zifuatazo huzingatiwa:
1) sura ya koloni - pande zote, amoeboid, rhizoid, isiyo ya kawaida, nk;

2) ukubwa (kipenyo) cha koloni - ndogo sana (iliyoelekezwa) (0.1-0.5 mm), ndogo (0.5-3 mm), ukubwa wa kati (3-5 mm) na kubwa (zaidi ya 5 mm kwa kipenyo);

3) uso wa koloni ni laini, mbaya, folded, wrinkled, na miduara concentric au radially striated;

4) wasifu wa koloni - gorofa, convex, umbo la koni, umbo la crater, nk;

5) uwazi - mwanga mdogo, matte, shiny, uwazi, unga;

6) rangi ya koloni (rangi) - isiyo na rangi au rangi (nyeupe, njano, dhahabu, nyekundu, nyeusi), hasa kumbuka kutolewa kwa rangi ndani ya kati na kuchorea kwake;

7) makali ya koloni - laini, wavy, jagged, pindo, nk;

8) muundo wa koloni - homogeneous, faini- au coarse-grained, streaky; makali na muundo wa koloni huamua kwa kutumia kioo cha kukuza au kwa ukuzaji wa chini wa darubini kwa kuweka sahani ya Petri na inoculation kwenye meza ya darubini na kifuniko chini;

9) msimamo wa koloni; kuamua kwa kugusa uso na kitanzi: koloni inaweza kuwa mnene, laini, kukua katika agar, mucous (kunyoosha nyuma ya kitanzi), tete (huvunja kwa urahisi wakati wa kuwasiliana na kitanzi).

Makoloni yenye kina kirefu mara nyingi huonekana kama dengu zaidi au chini ya bapa (umbo la mviringo na ncha zilizochongoka), wakati mwingine madonge ya pamba yenye vichipukizi-kama uzi kwenye katikati ya virutubishi. Uundaji wa makoloni ya kina mara nyingi hufuatana na kupasuka kwa kati mnene ikiwa microorganisms hutoa gesi.

Makoloni ya chini kawaida huonekana kama filamu nyembamba za uwazi zinazoenea chini.

Tabia za koloni zinaweza kubadilika na umri; zinategemea muundo wa kati na joto la kilimo.

Ukuaji wa vijidudu kwenye vyombo vya habari vya virutubishi vya kioevu huzingatiwa kwa kutumia tamaduni za siku nne hadi saba zilizokuzwa chini ya hali ya stationary.

Katika vyombo vya habari vya virutubisho vya kioevu, pamoja na ukuaji wa microorganisms, turbidity ya kati na uundaji wa filamu au sediment huzingatiwa.

Wakati wa kukua kwenye vyombo vya habari vya virutubisho vya nusu-kioevu (0.5-0.7% agar), vijidudu vya rununu husababisha uchafu uliotamkwa, fomu zisizohamishika hukua tu wakati wa kupanda kwa sindano ndani ya kati.

Mara nyingi ukuaji wa microbes unaambatana na kuonekana kwa harufu, rangi ya mazingira, na kutolewa kwa gesi. Harufu ya tabia ya tamaduni za aina fulani za bakteria inahusishwa na malezi ya esta mbalimbali (ethyl acetate, amyl acetate, nk), indole, mercaptan, sulfidi hidrojeni, skatole, amonia, asidi ya butyric.

Uwezo wa kuunda rangi ni asili katika aina nyingi za microorganisms. Asili ya kemikali ya rangi ni tofauti: carotenoids, anthocyanins, melanini. Ikiwa rangi haipatikani katika maji, plaque ya kitamaduni tu ni kubadilika; ikiwa ni mumunyifu, kati ya virutubisho pia inakuwa rangi. Inaaminika kuwa rangi hulinda bakteria kutokana na athari mbaya za jua, ndiyo sababu kuna bakteria nyingi za rangi katika hewa kwa kuongeza, rangi zinahusika katika kimetaboliki ya microorganisms hizi.

Kwa asili, kuna bakteria inayoitwa phosphorescent, tamaduni ambazo huangaza gizani na mwanga wa kijani-bluu au njano. Bakteria hizo hupatikana hasa katika maji ya mto au bahari. Bakteria ya mwanga - photobacteria - ni pamoja na bakteria ya aerobic (vibrios, cocci, viboko).

Kutengwa kwa tamaduni safi za microorganisms

Nyenzo zinazochunguzwa (maji, udongo, hewa, chakula au vitu vingine) kwa kawaida huwa na uhusiano wa vijidudu.

Kutengwa kwa utamaduni safi hufanya iwezekanavyo kujifunza tabia ya morphological, kitamaduni, biochemical, antigenic na nyingine, jumla ambayo huamua aina na aina ya pathogen, yaani, kitambulisho chake kinafanywa.

Ili kutenganisha tamaduni safi za vijidudu, njia hutumiwa ambazo zinaweza kugawanywa katika vikundi kadhaa:
1. Njia ya Pasteur - dilution ya mfuatano wa nyenzo za mtihani katika kati ya virutubisho kioevu hadi mkusanyiko wa seli moja katika kiasi (ina umuhimu wa kihistoria).

2. Njia ya Koch ("wiring ya sahani") - dilution ya mlolongo wa nyenzo za mtihani katika agar iliyoyeyuka (joto 48-50 C), ikifuatiwa na kumwaga ndani ya sahani za Petri, ambapo agar huimarisha. Chanjo hufanywa, kama sheria, kutoka kwa dilutions tatu au nne za mwisho, ambapo bakteria huwa chache na baadaye, wanapokua kwenye sahani za Petri, makoloni ya pekee yanaonekana, yaliyoundwa kutoka kwa seli moja ya mama ya awali. Kutoka kwa makoloni ya pekee ndani ya agar, utamaduni safi wa bakteria hupatikana kwa subculture kwenye vyombo vya habari safi.

3. Njia ya Shukevich - inayotumiwa kupata utamaduni safi wa Proteus na microorganisms nyingine na ukuaji "watambaao". Nyenzo ya mtihani huingizwa kwenye maji ya condensation kwenye msingi wa slant ya agar. Vijidudu vya rununu (Proteus) vinaweza kuinua agar iliyoinama, fomu zisizohamishika zinabaki kukua chini, kwenye tovuti ya kupanda. Kwa kuweka upya kingo za juu za tamaduni, unaweza kupata utamaduni safi.

4. Njia ya Drigalsky - inayotumiwa sana katika mazoezi ya bacteriological, ambayo nyenzo zinazojifunza hupunguzwa kwenye tube ya mtihani na suluhisho la salini isiyo na kuzaa au mchuzi. Tone moja la nyenzo huongezwa kwenye kikombe cha kwanza na kuenea juu ya uso wa kati kwa kutumia spatula ya kioo yenye kuzaa. Kisha, kwa spatula sawa (bila kuwaka katika moto wa burner), upandaji sawa unafanywa katika vikombe vya pili na vya tatu.

Kwa kila chanjo ya bakteria, kidogo na kidogo inabaki kwenye spatula na, wakati wa kupanda kwenye kikombe cha tatu, bakteria itasambazwa juu ya uso wa kati ya virutubisho tofauti na kila mmoja. Baada ya siku 1-7 za kuweka vyombo kwenye thermostat (kulingana na kiwango cha ukuaji wa vijidudu), kwenye sahani ya tatu, kila bakteria hutoa safu ya seli, na kutengeneza koloni iliyotengwa, ambayo hupandwa kwenye agar iliyokatwa ili kujilimbikiza. utamaduni safi.

5. Mbinu ya Weinberg. Ugumu hasa hutokea wakati wa kutenganisha tamaduni safi za anaerobes za lazima. Ikiwa kuwasiliana na oksijeni ya molekuli haisababishi kifo cha seli mara moja, basi mbegu hufanywa kulingana na njia ya Drigalsky, lakini baada ya hii sahani huwekwa mara moja kwenye anaerostat. Walakini, njia ya kuzaliana hutumiwa mara nyingi zaidi. Kiini chake kiko katika ukweli kwamba dilution ya nyenzo chini ya utafiti unafanywa katika kuyeyuka na kilichopozwa hadi 45-50 oC agar kati ya virutubisho.

Dilutions 6-10 mfululizo hufanywa, kisha kati katika zilizopo za mtihani hupozwa haraka na uso unafunikwa na safu ya mchanganyiko wa mafuta ya taa na mafuta ya petroli ili kuzuia hewa kupenya ndani ya unene wa kati ya virutubisho. Wakati mwingine kati ya virutubisho, baada ya kupanda na kuchanganya, huhamishiwa kwenye zilizopo za Burri za kuzaa au pipettes ya capillary Pasteur, ambayo mwisho wake imefungwa. Pamoja na kuyeyushwa kwa ufanisi, makundi yaliyotengwa ya anaerobes hukua katika mirija ya majaribio, mirija ya Burri, na bomba za Pasteur. Ili kuhakikisha kuwa makoloni ya pekee yanaonekana wazi, vyombo vya habari vya virutubisho vilivyofafanuliwa hutumiwa.

Ili kutoa koloni zilizotengwa za anaerobes, bomba huwashwa kidogo kwa kuizungusha juu ya moto, wakati agar iliyo karibu na kuta inayeyuka na yaliyomo kwenye bomba kwa namna ya safu ya agar huteleza ndani ya sahani ya Petri isiyo na kuzaa. Safu ya agar hukatwa na vidole vya kuzaa na makoloni huondolewa kwa kitanzi. Makoloni yaliyotolewa huwekwa kwenye kati ya kioevu inayofaa kwa ajili ya maendeleo ya microorganisms pekee. Agar medium hupulizwa nje ya bomba la Burri kwa kupitisha gesi kupitia kuziba pamba.

6. Mbinu ya Hungate. Wanapotaka kupata makundi yaliyotengwa ya bakteria yenye unyeti mkubwa sana kwa oksijeni (aerobes kali), mbinu ya bomba inayozunguka ya Hungate hutumiwa. Ili kufanya hivyo, kati ya agar iliyoyeyuka huingizwa na bakteria kwa sasa ya mara kwa mara kupitia tube ya mtihani wa gesi ya inert iliyotolewa kutoka kwa uchafu wa oksijeni. Kisha bomba limefungwa na kizuizi cha mpira na kuwekwa kwa usawa katika clamp inayozunguka tube; kati inasambazwa sawasawa juu ya kuta za tube ya mtihani na kuimarisha kwenye safu nyembamba. Matumizi ya safu nyembamba katika tube ya mtihani iliyojaa mchanganyiko wa gesi inaruhusu mtu kupata makoloni ya pekee ambayo yanaonekana wazi kwa jicho la uchi.

7. Kutengwa kwa seli za kibinafsi kwa kutumia micromanipulator. Micromanipulator ni kifaa kinachokuwezesha kuondoa seli moja kutoka kwa kusimamishwa kwa kutumia micropipette maalum au microloop. Operesheni hii inadhibitiwa kwa darubini. Chumba cha unyevu kimewekwa kwenye hatua ya darubini, ambayo maandalizi ya tone ya kunyongwa huwekwa. Micropipettes (micropoops) ni fasta katika wamiliki wa anasimama uendeshaji, harakati ambayo katika uwanja wa mtazamo wa darubini unafanywa kwa shukrani micron usahihi kwa mfumo wa screws na levers. Mtafiti, akiangalia kwa darubini, huondoa seli moja na micropipettes na kuzihamisha kwenye mirija iliyo na kioevu tasa ili kupata clone ya seli.

L.V. Timoschenko, M.V. Chubik

Mazingira maalum.

Katika bacteriology, vyombo vya habari vya virutubisho vya kavu vinavyozalishwa viwandani vinatumiwa sana, ambavyo ni poda za hygroscopic zilizo na vipengele vyote vya kati isipokuwa maji. Kwa ajili ya maandalizi yao, digests ya tryptic ya bidhaa za bei nafuu zisizo za chakula (taka ya samaki, nyama na mfupa wa mfupa, casein ya kiufundi) hutumiwa. Wao ni rahisi kwa usafiri, wanaweza kuhifadhiwa kwa muda mrefu, kupunguza maabara kutoka kwa mchakato mkubwa wa kuandaa vyombo vya habari, na kuwaleta karibu na kutatua suala la viwango vya vyombo vya habari. Sekta ya matibabu inazalisha vyombo vya habari vya kavu Endo, Levin, Ploskirev, bismuth sulfite agar, agar ya virutubisho, wanga na kiashiria cha BP na wengine.

Vidhibiti vya halijoto

Thermostats hutumiwa kwa kulima microorganisms.

Thermostat ni kifaa ambacho kinadumisha joto la kawaida. Kifaa kina heater, chumba, kuta mbili, kati ya ambayo hewa au maji huzunguka. Joto hudhibitiwa na thermostat. Joto bora kwa ajili ya kuzaliana kwa vijidudu vingi ni 37 ° C.

SOMO LA 7

MADA: MBINU ZA ​​KUTENGA UTAMADUNI SAFI WA AEROBES. HATUA ZA KUTENGWA KWA UTAMADUNI SAFI WA BAKTERIA WA AEROBIKI KWA NJIA YA UTENGENEZAJI WA MITAMBO.

Mpango wa somo

1. Dhana ya "utamaduni safi" wa bakteria

2. Mbinu za kutenganisha tamaduni safi kwa kutenganisha mitambo

3. Mbinu za kibiolojia za kutenganisha tamaduni safi

4. Mbinu za kutambua bakteria

Kusudi la somo: Kuwafahamisha wanafunzi mbinu mbalimbali za kutenga tamaduni safi, kufundisha jinsi ya kupanda kwa kitanzi, mipigo, na sindano.

Miongozo ya maandamano

Katika mazingira yao ya asili, bakteria hupatikana katika vyama. Ili kuamua mali ya microbes na jukumu lao katika maendeleo ya mchakato wa pathological, ni muhimu kuwa na bakteria kwa namna ya watu wenye homogeneous (tamaduni safi). Utamaduni safi ni mkusanyiko wa bakteria ya spishi zile zile zinazokuzwa kwenye lishe.

Njia za kutenganisha tamaduni safi za bakteria ya aerobic

Njia ya Pasteur Njia ya Koch ya Biolojia ya Kimwili

(ina ya kihistoria (wiring ya sahani)

Maana)

Mbinu ya Kemikali

Shchukevich

Kisasa

Kupanda kwa kitanzi Kupanda kwa spatula

(Njia ya Drigalski)

Njia za kutenganisha tamaduni safi:

1. Mbinu za kutenganisha mitambo zinatokana na mgawanyo wa microbes kwa kusugua kwa mfululizo wa nyenzo za mtihani juu ya uso wa agar.

a) Mbinu ya Pasteur - ina umuhimu wa kihistoria, hutoa dilution ya mfuatano wa nyenzo za jaribio katika njia ya virutubishi kioevu kwa njia ya kukunja.

b) Njia ya Koch - njia ya sahani - inategemea dilution ya mlolongo wa nyenzo za mtihani na agar ya peptone ya nyama, ikifuatiwa na kumwaga zilizopo za mtihani na nyenzo za diluted kwenye sahani za Petri.

c) Njia ya Drigalsky - wakati wa kupanda nyenzo zilizopandwa sana na microflora, tumia vikombe 2-3 kwa kupanda kwa mpangilio na spatula.

d) Kupanda kwa kitanzi kwa mipigo sambamba.

2. Mbinu za kibiolojia zinategemea mali ya kibiolojia ya pathogens.

a) Biolojia - maambukizi ya wanyama nyeti sana, ambapo microbes huzidisha haraka na kujilimbikiza. Katika baadhi ya matukio, njia hii ndiyo pekee ambayo inaruhusu mtu kutenganisha utamaduni wa pathogen kutoka kwa mtu mgonjwa (kwa mfano, na tularemia), katika hali nyingine ni nyeti zaidi (kwa mfano, kutengwa kwa pneumococcus katika panya nyeupe au pathojeni ya kifua kikuu katika nguruwe za Guinea).

b) Kemikali - kulingana na upinzani wa asidi ya mycobacteria. Ili kufungia nyenzo kutoka kwa mimea inayoandamana, ni
kutibiwa na suluhisho la asidi. Bacilli ya kifua kikuu tu itakua, kwani vijidudu visivyo na asidi vilikufa chini ya ushawishi wa asidi.

c) Njia ya kimwili inategemea upinzani wa spores kwa joto. Kutenga utamaduni wa bakteria wanaotengeneza spora kutoka
mchanganyiko, nyenzo huwashwa kwa 80 ° C na kuingizwa kwenye kati ya virutubisho. Bakteria ya spore tu ndio itakua, kwani spores zao zilibaki hai na zilisababisha ukuaji.

d) Njia ya Shchukevich - kulingana na uhamaji wa juu wa Proteus vulgaris, wenye uwezo wa kuzalisha ukuaji wa kutambaa.

Njia ya kuandaa agar ya sahani

MPA huyeyushwa katika umwagaji wa maji, kisha kupozwa hadi 50-55 ° C. Shingo ya chupa imechomwa kwenye moto wa taa ya pombe, vyombo vya Petri vinafunguliwa ili shingo ya chupa iingie bila kugusa kingo za sahani, 10-15 ml ya MPA hutiwa ndani, kifuniko kinawekwa. imefungwa, sahani inatikiswa ili kati isambazwe sawasawa, na kushoto juu ya uso wa usawa mpaka iwe ngumu. Baada ya kukausha, sahani za agar huhifadhiwa kwenye baridi.

Kupanda kitanzi

Kwa kutumia kitanzi kilichopozwa tasa, chukua tone la nyenzo, fungua ukingo mmoja wa kikombe kwa mkono wako wa kushoto, lete kitanzi ndani na ufanye viboko vichache katika sehemu moja na kitanzi kwenye ukingo wa pili, kisha vunja kitanzi na chanjo. nyenzo katika viboko sambamba kutoka kwa makali moja ya kikombe hadi nyingine na muda wa 5-6 mm. Mwanzoni mwa kupanda, wakati kuna vijidudu vingi kwenye kitanzi, watatoa ukuaji wa usawa, lakini kwa kila kiharusi kuna vijidudu vichache na vichache kwenye kitanzi, na watabaki peke yao na kutoa koloni zilizotengwa.

Kupanda kulingana na njia ya Drigalsky

Njia hii hutumiwa wakati wa kuingiza nyenzo zilizochafuliwa sana na microflora (pus, kinyesi, sputum). Ili kupanda kwa kutumia njia ya Drigalsky, chukua spatula na vikombe kadhaa (3-4). Spatula ni chombo kilichofanywa kwa waya wa chuma au dart ya kioo, iliyopigwa ndani ya pembetatu au L-umbo. Nyenzo huletwa ndani ya kikombe cha kwanza na kitanzi au pipette na kusambazwa sawasawa na spatula juu ya uso wa kati, na spatula sawa, bila kuwaka, nyenzo hupigwa kwenye chombo cha virutubisho kwenye kikombe cha pili; katika ya tatu. Kwa kupanda vile, kikombe cha kwanza kitakuwa na ukuaji wa confluent, na makoloni ya pekee yatakua katika vikombe vinavyofuata.

Hatua kuu katika maendeleo ya microbiology, virology na immunology

Hizi ni pamoja na zifuatazo:

1.Maarifa ya kisayansi(kabla ya uvumbuzi wa darubini na matumizi yao kwa kusoma ulimwengu mdogo).

J. Fracastoro (1546) alipendekeza hali ya maisha ya mawakala wa magonjwa ya kuambukiza - contagium vivum.

2.Kipindi cha morphological ilichukua takriban miaka mia mbili.

Antonie van Leeuwenhoek mnamo 1675 kwanza alielezea protozoa, mwaka wa 1683 - aina kuu za bakteria. Kutokamilika kwa vyombo (ukuzaji wa juu wa darubini ya X300) na njia za kusoma ulimwengu mdogo haukuchangia mkusanyiko wa haraka wa maarifa ya kisayansi juu ya vijidudu.

3.Kipindi cha kisaikolojia(tangu 1875) - zama za L. Pasteur na R. Koch.

L. Pasteur - utafiti wa misingi ya microbiological ya mchakato wa fermentation na kuoza, maendeleo ya microbiolojia ya viwanda, ufafanuzi wa jukumu la microorganisms katika mzunguko wa vitu katika asili, ugunduzi. anaerobic microorganisms, maendeleo ya kanuni asepsis, mbinu kufunga kizazi, kudhoofisha ( kupunguza)virusi na kupokea chanjo (matatizo ya chanjo).

R. Koch - njia ya kujitenga tamaduni safi kwenye media dhabiti ya virutubishi, njia za kutia madoa bakteria na rangi ya aniline, ugunduzi wa mawakala wa causative wa kimeta, kipindupindu ( Koch koma), kifua kikuu (vijiti vya Koch), uboreshaji wa teknolojia ya hadubini. Uthibitisho wa majaribio wa vigezo vya Henle, vinavyojulikana kama postulates za Henle-Koch (triad).

4.Kipindi cha Immunological.

I.I. Mechnikov ndiye "mshairi wa biolojia" kulingana na ufafanuzi wa kielelezo wa Emil Roux. Aliunda enzi mpya katika biolojia - fundisho la kinga (kinga), kukuza nadharia ya phagocytosis na kudhibitisha nadharia ya seli ya kinga.

Wakati huo huo, data ilikusanywa juu ya uzalishaji katika mwili kingamwili dhidi ya bakteria na wao sumu, ambayo iliruhusu P. Ehrlich kuendeleza nadharia ya ucheshi ya kinga. Katika mjadala uliofuata wa muda mrefu na wenye matunda kati ya wafuasi wa nadharia za phagocytic na humoral, mifumo mingi ya kinga ilifunuliwa na sayansi ilizaliwa. elimu ya kinga.

Baadaye iligundua kuwa kinga ya urithi na inayopatikana inategemea shughuli iliyoratibiwa ya mifumo kuu tano: macrophages, inayosaidia, T- na B-lymphocytes, interferon, mfumo mkuu wa histocompatibility, ambayo hutoa aina mbalimbali za majibu ya kinga. I.I. Mechnikov na P. Erlich mnamo 1908. tuzo ya Nobel ilitolewa.

Februari 12, 1892 Katika mkutano wa Chuo cha Sayansi cha Urusi, D. Ivanovsky aliripoti kwamba wakala wa causative wa ugonjwa wa mosai ya tumbaku ni virusi vinavyoweza kuchujwa. Tarehe hii inaweza kuchukuliwa kuwa siku ya kuzaliwa virusi, na D. Ivanovsky ndiye mwanzilishi wake. Baadaye, iliibuka kuwa virusi husababisha magonjwa sio tu kwa mimea, bali pia kwa wanadamu, wanyama na hata bakteria. Hata hivyo, tu baada ya asili ya jeni na kanuni za maumbile kuanzishwa, virusi ziliainishwa kama asili hai.

5. Hatua inayofuata muhimu katika maendeleo ya microbiolojia ilikuwa ugunduzi wa antibiotics. Mnamo 1929 A. Fleming aligundua penicillin na enzi ya tiba ya viua vijasumu ilianza, na kusababisha maendeleo ya mapinduzi katika dawa. Baadaye iliibuka kuwa vijidudu huzoea viuavijasumu, na uchunguzi wa mifumo ya upinzani wa dawa ulisababisha ugunduzi wa sekunde. jenomu ya extrachromosomal (plasmid). bakteria.

Kusoma plasmidi ilionyesha kuwa ni viumbe vilivyoundwa kwa urahisi zaidi kuliko virusi, na tofauti bacteriophages usidhuru bakteria, lakini uwape mali ya ziada ya kibaolojia. Ugunduzi wa plasmids umepanua kwa kiasi kikubwa uelewa wa aina za kuwepo kwa maisha na njia zinazowezekana za mageuzi yake.

6. Kisasa hatua ya maumbile ya Masi Maendeleo ya microbiolojia, virology na immunology ilianza katika nusu ya pili ya karne ya 20 kuhusiana na mafanikio ya genetics na biolojia ya molekuli, na kuundwa kwa darubini ya elektroni.

Majaribio juu ya bakteria yamethibitisha jukumu la DNA katika usambazaji wa sifa za urithi. Matumizi ya bakteria, virusi, na plasmidi baadaye kama vitu vya biolojia ya molekuli na utafiti wa kijeni imesababisha uelewa wa kina wa michakato ya msingi ya maisha. Ufafanuzi wa kanuni za usimbaji maelezo ya kijeni katika DNA ya bakteria na kubainisha umoja wa kanuni za kijeni kulifanya iwezekane kuelewa vyema mifumo ya kijenetiki ya molekuli tabia ya viumbe vilivyopangwa zaidi.

Kusimbua jenomu ya Escherichia coli kumewezesha kubuni na kupandikiza jeni. Kwa sasa Uhandisi Jeni imeunda mwelekeo mpya bioteknolojia.

Shirika la maumbile ya molekuli ya virusi vingi na taratibu za mwingiliano wao na seli zimefafanuliwa, uwezo wa DNA ya virusi kuunganisha kwenye genome ya seli nyeti na taratibu za msingi za kansajeni ya virusi zimeanzishwa.

Immunology imepitia mapinduzi ya kweli, kwenda mbali zaidi ya upeo wa kinga ya kuambukiza na kuwa moja ya taaluma muhimu zaidi za matibabu na kibaolojia. Hadi sasa, immunology ni sayansi ambayo inasoma sio ulinzi tu dhidi ya maambukizi. Kwa maana ya kisasa Immunology ni sayansi ambayo inasoma mifumo ya kujilinda ya mwili kutoka kwa kila kitu kigeni, kudumisha uadilifu wa muundo na utendaji wa mwili.

Immunology kwa sasa inajumuisha idadi ya maeneo maalumu, kati ya ambayo, pamoja na immunology ya kuambukiza, muhimu zaidi ni pamoja na immunogenetics, immunomorphology, immunology ya upandikizaji, immunopathology, immunohematology, oncoimmunology, ontogenesis immunology, chanjo na immunodiagnostics kutumika.

Microbiology na virology kama sayansi ya kimsingi ya kibiolojia pia ni pamoja na idadi ya taaluma za kisayansi huru na malengo na malengo yao wenyewe: jumla, kiufundi (viwanda), kilimo, mifugo na yale ya umuhimu mkubwa kwa ubinadamu. microbiology ya matibabu na virology.

Mikrobiolojia ya kimatibabu na virolojia husoma visababishi vya magonjwa ya kuambukiza ya binadamu (mofolojia yao, fiziolojia, ikolojia, sifa za kibaolojia na maumbile), hutengeneza mbinu za ukuzaji na utambuzi wao, mbinu mahususi za utambuzi, matibabu na uzuiaji wao.